病毒传输媒体（VTM） - 原理，准备，用途，限制

经过

病毒传输媒体（VTM）定义

病毒传输介质（VTM）是用于携带和维持试样（病毒）的活力，用于鉴定和进一步加工样品的实验室的营养物质。

  • 用于病毒的运输媒体尤为重要，因为它们比其他传染病更具不稳定。
  • 当培养物的收集和接种之间的时间间隔较少并且当样品尽可能多的病毒颗粒时，成功隔离的概率增加增加。
  • 为了最大限度地提高样本中的病毒量，样品收集应在患者疾病的早期完成。
  • 当使用合适的运输介质时，可以实现成功且可靠的病毒分离。
  • 当病毒样本被送到本地实验室或参考实验室时，隔离计数也会增加。

病毒传输媒体（VTM）

图：病毒传输媒体（VTM）。图像来源：BD.。

病毒传输媒体原理（VTM）

  • 病毒剂在组成，稳定性，结构，形态和尺寸方面存在广泛。从人类样品中获得的松散包装的包膜病毒通常比非包裹的致密病毒更加不稳定。
  • 由于它们是不稳定的环境条件，因此必须使用不同的解决方案保护这些病毒的可行性。
  • 一些包膜病毒，例如单纯疱疹病毒（HSV），当放置在合适的保持环境中时，在非冷冻状态下令人惊讶地稳定。然而，大多数病毒确实需要较冷的温度。
  • 病毒的感染性随着时间的推移而降低，并且通常，衰减率是温度的函数，因此通过冷却增强稳定性
  • 因此，通过提供适当的温度，pH和营养素的想法制备病毒传输介质。
  • 选择适当的病毒转运介质的成分以产生含有蛋白质的等渗溶液以保护病毒结构，抗生素来控制微生物污染，以及一种或多种缓冲剂以控制pH。
  • 使用核酸扩增试验（NaAt）的试验等试验的概念制备病毒传输介质，同时防止样品干燥等试验。

病毒转运介质的组成（VTM）

理想的病毒传输介质具有以下许多特征;

  1. 即使在室温下，它也会保留病毒的活动。
  2. 细胞培养物不会毒性，而不是模糊病毒性细胞病变的外观。
  3. 它将具有长的保质期（以冷冻或非冷冻状态）。
  4. 它适用于培养分离和直接测试，如酶免疫测定或免疫荧光。
  • 为了实现所有上述特征，病毒传输介质通常具有保护蛋白组分，抗微生物剂以防止污染的可能性，并缓冲液维持溶液的pH。
  • 一些VTM还具有额外的离子和矿物，有助于保持这种样本的可行性。

病毒转运培养基的制备（VTM）

  • 许多病毒传输介质是可商购的，可以在提到的条件下直接购买并使用。
  • 一些这样的媒体包括CopAn通用传输媒体和鹰最小基本培养基（E-MEM）。
  • 然而，可以在局部地制备一些其他介质，同时保持合适的条件和组合物。
  • 不同病毒转运的组合物和制备根据样品是否从人或其他动物中取消而不同。

对于人类的标本：

以下是为局部制造VTM的制备方法，用于来自人类的鼻和喉咙拭子：

  • 将10g小牛肉输注肉汤和2g牛白蛋白级分v加入无菌蒸馏水（至400ml）。
  • 加入0.8ml庆大霉素硫酸盐溶液（50mg / ml）和3.2ml两性霉素B（250μg/ ml） -
  • 过滤灭菌。

以下是更精细的程序为人类制备更大体积的VTM：

  1. 通过在56.0℃+/- 1.0℃下在水浴中加热30分钟，在水浴中灭活500ml胎牛血清（FBS）。如果可用，可以使用商业灭活的FBS。
  2. 加入50ml两性霉素B，将50ml庆大霉素加入灭活FBS，然后过滤溶液通过0.20至0.45μm过滤器单元（150ml过滤器单元）。
  3. 将10ml的FBS加入500ml的Hanks平衡盐溶液（HBSS）。
  4. 将2ml庆大霉素/两性霉素B混合物加入预先形成的用FBS形成的HBS。
  5. 将解决方案分散给瓶子和瓶子。通过反转瓶子混合。
  6. 将瓶子与生产，添加剂和到期日期一起标记。
  7. 将3ml培养基等分为单独的无菌圆锥形螺纹管（如16x100mm管）。介质分配后保持盖子紧密关闭。使用必要的信息标记容器。
  8. 存放在2-8°C。

对于来自动物的标本：

  • 对于动物中标本的收集和运输，可以使用两种类型的VTM。
  • 运输媒体199广泛用于来自所有物种的临床标本的收集和运输。
  • 作为甘油基培养基的第二培养基，PBS-甘油转运介质提供了较长术语的试样的稳定性，其中不立即冷却。
  • 它适用于鸡蛋接种，但不适合组织培养接种。

运输媒体的制备199

  1. 服用组织培养基199，含有0.5％牛血清白蛋白（BSA）。
  2. 上述1升添加：苄基彭霉素（2 x 106.IU /升），链霉素（200 mg /升），多粘菌素B（2 x 106.IU /升），庆大霉素（250毫克/升），黑斯坦（0.5 x 106.IU /升），盐酸氧氟沙星（60mg /升）和磺胺甲恶唑（0.2g /升）。
  3. 过滤灭菌，并在螺纹管中的1.0-2.0ml体积分布。

PBS-甘油转运培养基的制备

  1. 通过加入8g NaCl，0.2g KCl，1.44g Na 2 HPO 4和0.24g KH 2 PO 4制备磷酸盐缓冲盐水。将蒸馏水加入该混合物中以使1升。
  2. 用无菌甘油混合物高压灭菌并混合1：1，使1升。
  3. 上述1升添加：苄基彭霉素（2 x 106.IU /升），链霉素（200 mg /升），多粘菌素B（2 x 106.IU /升），庆大霉素（250毫克/升），黑斯坦（0.5 x 106.IU /升），盐酸氧氟沙星（60mg /升）和磺胺甲恶唑（0.2g /升）。
  4. 将1.0-2.0毫升的运输媒体分配到无菌塑料螺帽上。
  5. 将这些小瓶在-20°C上储存直至在室温下或在1-2天的短时间使用或在室温下。

视频：Thermo Fisher Scientific的新型病毒运输媒体制造厂

使用病毒传输媒体（VTM）

  • 病毒传输介质用于收集和运输含有病毒的样本。
  • 这些也用于维持其他生物如支原体，衣原体和泌尿瓣等生物的可行性。
  • VTM还有助于最大化样品中的病毒颗粒的数量。
  • 液体传输介质主要用于将拭子或材料从收集拭子传送到介质中。
  • 它有助于在不可用的区域的区域中收集和运输样品。

病毒传输媒体的局限性（VTM）

  • 在长期的运输期间，可能会观察到污染物的一些生长。
  • 运输后，应尽快接种在适当的培养基中。为了获得最佳结果，应将样品收集和接种物之间的时间流逝降至最低。
  • 一些病毒可能比其他病毒更加不稳定，而VTM可能会有效。
  • VTM中使用的一些抗生素和化学物质可能会改变溶液的pH值，这会影响生物体的活力。

参考资料和来源


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