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什么是齐尔-尼尔森染色法?
Ziehl-Neelsen染色技术是一种差异染色技术，最初由Ziehl开发，后来由Neelsen改进，因此命名为Ziehl-Neelsen染色。
- 尼尔森使用齐尔实验中的carbol fuschin，加热并添加使用酸性乙醇的脱色剂和使用亚甲基蓝染料的复染剂，从而发展了齐尔-尼尔森染色技术。
- 在这项技术中使用的酸-酒精为它赢得了这个名字抗酸染色这种技术的热应用给了它一个名字热抗酸染色法哪个是?的同义词Ziehl-Neelsen染色技术。
- 该技术用于不易被碱性染色(如阴性染色或革兰氏染色)染色的微生物。最复杂的微生物之一，需要严格处理齐尔-尼尔森化合物是分枝杆菌spp。
- 分枝杆菌、放线菌、褐藻、等孢菌、隐孢子虫、，有些真菌含有一层厚的细胞壁，由类脂复合体组成，称为霉酸。
- 霉菌酸很难染色，因此像革兰氏染色这样简单的染色剂不能穿透这些生物的厚细胞壁。
- 它们需要更严厉的处理，以允许染色渗透进行识别和检查，因此使用Ziehl-Neelsen或热法抗酸染色。
齐尔-尼尔森染色法的目的
- 区分抗酸杆菌和非抗酸杆菌。
- 玷污分枝杆菌物种。
Ziehl-Neelsen染色原理
- Ziehl-Neelsen染色法使用碱性品红和酚类化合物对分支杆菌的细胞壁进行染色。
- 分枝杆菌不容易与简单的染色剂结合，因此使用碳fuschin和苯酚加热可以穿透细菌细胞壁进行观察。
- 分枝杆菌细胞壁含有由霉菌酸组成的高脂含量，使其细胞壁呈蜡状，疏水，不透水。这些都是ß-羟基羧酸由90个碳原子组成，决定了细菌的耐酸性。
- 使用碳fuschin，它是碱性强结合的细菌的负成分，包括真菌酸和脂质细胞壁。酸醇的加入与加热作用形成了一种很强的络合物，不容易被溶剂洗掉。
- 抗酸杆菌吸收了原色碳褐藻的红色。
- 而非耐酸菌在加入酸性乙醇后容易脱色，并吸附亚甲基蓝的复染染料而呈蓝色
- 这项技术已被用于鉴定结核分枝杆菌和麻风杆菌．
Ziehl-Neelsen染色中使用的试剂
- Carbol-Fuschin(主要染料)
- 20%硫酸或酸醇（脱色剂）
- 亚甲基蓝染料（复染）或孔雀绿
试剂的制备
Carbol fuschin
- 蒸馏水-100毫升
- 基本fuschin - 1 g
- 乙醇（100%乙醇）-10ml
- 酚晶体- 5毫升
酸性酒精(95%乙醇中含有3%盐酸)
- 酒精- 95毫升
- 蒸馏水- 2毫升
- 浓盐酸-3毫升
0.25%亚甲基蓝在1%醋酸中
- 亚甲蓝- 0.25 g
- 蒸馏水- 99毫升
- 醋酸-1ml
Ziehl-Neelsen染色程序
图片来源:伊丽莎白灰色．
- 在一个干净的无菌显微镜载玻片上，做样品培养的涂片，并用蓝色热固定涂片。
- 在涂抹处倒上胭脂，用胭脂慢慢加热，直到产生烟雾。
- 静置5分钟后，用流动的自来水冲洗干净。
- 加入20%的硫酸，静置1-2分钟。重复此步骤，直到涂抹显示粉红色。
- 用水把酸洗掉。
- 用亚甲基蓝染料浸没涂片2-3分钟，然后用水冲洗。
- 风干后，在油浸透镜下检查污渍。
结果和解释
图：结核分枝杆菌用齐尔-尼尔森染色法进行可视化图片来源:疾病预防控制中心/乔治P。库比卡．
- 抗酸细菌保留了主要的染料——碳淡褐色，并将其染成粉红色。
- 非酸性脂肪细菌吸收亚甲基蓝染料并呈现蓝色。
齐尔-尼尔森染色法的应用
- 用于检验和鉴定分枝杆菌物种。
- 用于区分抗酸和非抗酸杆菌
- 用于鉴定某些真菌种类，如隐孢子虫．
Ziehl-Neelsen染色的局限性
- 它只能用于鉴定抗酸杆菌。
- 有机体的物理形态被扭曲了。
引用和来源
- 2% – https://labhelpline.com/2019/05/23/ziehl-neelsen-staining-technique-for-acid-fast-bacilli/
- 1%——https://www.uwyo.edu/virtual_edge/units/acidfast_stain.html
- 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17533853/
- 1%——https://www.differencebetween.com/difference-between-acid-fast-and-vs-non-acid-fast-bacteria/
- 1%——https://www.carolina.com/specialty——化学物质——a/acid -醇- 3 -盐酸-乙醇酸-在- 95 -年级- 500 ml/841733.pr——实验室
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- <1% – https://www.researchgate.net/post/Why_Are_Mycobacteria_Acid_Fast
- <1% – https://quizlet.com/145783763/microbiology-hw-quiz-flash-cards/
- < 1%, https://en.wikipedia.org/wiki/Kinyoun_stain
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