细菌生长曲线协议

• 当在新鲜液体培养基中接种一定数量的细菌并培养足够的时间时，就会产生一种特殊的细菌生长模式。
• 如果定期测量细菌种群，并将活菌数量的对数绘制成随时间变化的曲线，就会得到一个特征生长曲线，称为生长曲线。
• 测量细菌的生长速率是一项基本的微生物学技术，在基础研究以及农业和工业应用中有着广泛的应用。

细菌生长曲线原理

当细菌被接种到液体培养基中，并每隔一段时间计数细胞数量时，就有可能绘制出典型的细菌生长曲线，显示细胞随时间的增长。它显示了四个不同的生长阶段。

• 滞后阶段:由于细胞对培养条件的生理适应或由于初始细胞密度低导致的外酶稀释，导致生长缓慢或缺乏生长。
• 对数相或指数相:最佳生长速率，在此期间细胞数量在离散时间间隔翻倍称为平均生成时间。
• 固定相:细胞的生长(细胞分裂)和死亡相互抵消，导致细胞数量没有净增加。生长速度下降通常是由于缺乏营养和/或有毒废物成分的积累。
• 衰落或死亡阶段:死亡率超过生长率，导致活细胞的净损失。

浊度测定用于绘制细菌在肉汤或液体介质中的生长曲线。它是用来分析生长趋势的最简单的方法之一，因为它使用分光光度计来跟踪光密度(OD)随时间的变化。换句话说，随着样品中细胞数量的增加，光通过样品的透射量会减少。

细菌生长曲线所需材料

细菌培养(大肠杆菌)，肉汤(Luria Bertani (LB)肉汤，营养肉汤)

玻璃器皿:锥形烧瓶，测量筒，无菌试管，无菌石化板

试剂:蒸馏水

其他要求:培养箱，摇床，分光光度计，微移液管，针尖，无菌环

细菌生长曲线的程序

第一天:

1. 使用无菌环，在琼脂平板上划一圈细菌培养物。
2. 孵化在37^oC保温18-24小时。

第二天:

1. 从琼脂平板上取每个菌株的单个菌落，并将其接种到含有10毫升蒸肉汤的试管中。
2. 将试管在37度下孵育一晚^oC。

第三天:

1. 取250毫升蒸熟的肉汤在一个500毫升无菌锥形烧瓶中。
2. 在上面的烧瓶中接种5毫升过夜培养的培养物。
3. 在零点吸食过量。将烧瓶在37度下孵育^oC。
4. 每隔30分钟取1 ml培养悬浮液，用分光光度计在波长为600 nm处取光密度(OD)，直至读数静止。

另一种方法是，每30分钟取1 ml的培养悬浮液等分液中加入50-100µl的甲醛。实验结束时，取所有等分线的光密度。

5. 实验结束时，在X轴上绘制以分钟为单位的时间图，在Y轴上绘制600nm处的光密度图，得到细菌的生长曲线。

细菌生长曲线的预期结果

得到的对数生长曲线显示了细菌种群的大小随培养时间的变化。由于细菌的指数生长模式，生长曲线呈双曲线。

参考文献

1. http://himedialabs.com/TD/HTM001.pdf
2. 梅尔，r.m.，佩珀，i.l.，和格巴，C.P.(2000)环境微生物学。学术出版社，圣地亚哥。
3. https://info.gbiosciences.com/blog/bacterial-growth-curves-turbidimetric-determination
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5. http://www.onlinebiologynotes.com/bacterial-growth-curve/
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7. https://www.encyclopedia.com/science/dictionaries-thesauruses-pictures-and-press-releases/bacterial-growth-curve
8. http://science.jrank.org/pages/714/Bacteria.html