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当用放射性同位素而不是酶作为标记与抗原或抗体结合时，检测抗原-抗体复合物的技术被称为放射免疫分析(RIA)。放射免疫分析法(RIA)是一种在体外检测具有很高灵敏度的抗原存在的试验。RIA于1960年首次被描述用于内源性血浆胰岛素的测量所罗门·伯森和罗莎琳·黄在纽约退伍军人管理医院工作
经典的RIA方法是基于竞争绑定原则的。在这种方法中，未标记抗原与放射性标记抗原竞争，以与具有适当特异性的抗体结合。因此，当放射性标记和未标记抗原的混合物与相应的抗体一起孵育时，游离的(未与抗体结合的)放射性标记抗原的数量与混合物中未标记抗原的数量成正比。
放射免疫检定法原理
它涉及三个原则的结合。
- 一种免疫反应抗原,抗体绑定。
- 竞争结合或竞争置换反应。(它使特异性)
- 无线电发射的测量。(它使灵敏度)
免疫反应:
当外来生物物质通过非口服途径进入人体血液时，机体识别外来物质表面的特定化学物质为抗原，产生针对该抗原的特异性抗体，以抵消其作用，保障机体安全。抗体是由身体的免疫系统产生的，所以这是一种免疫反应。在这里抗体或抗原结合移动由于化学影响。这与电泳原理不同，电泳原理是由于电荷而分离蛋白质。
竞争结合或竞争置换反应:
这是一种现象，当有两种抗原可以与同一抗体结合时，浓度较高的抗原广泛结合，有限的抗体取代其他抗体。在这个实验中，一个放射性标记的抗原被允许与高亲和性抗体结合。然后，当病人血清中加入未标记抗原时，开始与抗体结合，取代标记抗原。
无线电辐射测量:
一旦孵化结束，就要洗掉任何未结合的抗原。然后对抗原-抗体复合物进行放射，测量放射标记抗原的伽马射线。
靶抗原以放射性方式标记，并与其特异性抗体结合(必须加入有限且已知的特异性抗体)。添加样本(如血清)是为了使制剂中标记的抗原和血清样本中未标记的抗原与特定抗体发生竞争反应。抗体的竞争将释放一定数量的标记抗原。这个量与已标记抗原与未标记抗原的比例成正比。然后可以生成一个结合曲线，使患者血清中的抗原量得以提取。这意味着，随着未标记抗原浓度的增加，更多的抗原会与抗体结合，取代标记的变体。然后将结合的抗原与未结合的抗原分离，并测定残留在上清液中的游离抗原的放射性。
抗原-抗体复合物可以通过与第二抗体交联或通过添加促进抗原-抗体复合物沉淀的试剂来沉淀。计数沉淀中的放射性允许测定与抗体沉淀的放射性标记抗原的数量。标准曲线是通过标绘抗体结合的放射性标记抗原与标准化未标记抗原已知浓度的百分比来构建的，患者样本中的抗原浓度是根据这条曲线推断的。
的极高的灵敏度是它的主要优势．
利用放射免疫检定法
- 该试验可用于测定血清中极少量(如纳克)的抗原和抗体。
- 该检测用于激素、药物、HBsAg和其他病毒抗原的定量。
- 分析生物液体中激素的纳米摩尔和皮摩尔浓度。
的RIA的局限性包括:
- 设备和试剂的费用
- 放射性标记化合物的保质期短
- 与放射性废物处理有关的问题。