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- 色谱法是一种重要的生物物理技术，它能使混合物的成分分离、鉴定和纯化，用于定性和定量分析。
- 在这种物理分离方法中，被分离的组分分布在两相之间，一相是静止的(stationary phase)，另一相是流动的(mobile phase)。根据所选择的固定相和流动相，它们可以有不同的类型。
- 薄层色谱(Thin Layer Chromatography)可以定义为一种将混合组分分离或识别为单个组分的方法，该方法使用精细分离的吸附剂固体/(液体)分散在平板上，液体作为流动相。
薄层色谱(TLC)原理
- 薄层色谱法是在一片玻璃、塑料或铝箔上进行的，该薄片涂有一薄层吸附材料，通常为硅胶、氧化铝（氧化铝）或纤维素。这层吸附剂称为固定相。
- 当样品被应用到极板上后，一种溶剂或溶剂混合物(称为流动相)通过毛细管作用被绘制到极板上。由于不同的分析物以不同的速度上升到薄层色谱板上，从而实现了分离。
- 因此，它是基于吸附色谱或分配色谱或两者的结合的原理，取决于吸附剂，它的处理和溶剂的性质。与固定相亲和度越高的组分运动越慢。对固定相亲和力较小的组分移动较快。
- 一旦发生分离，单个组件将被视为板上相应行程水平上的斑点。通过适当的检测技术识别其性质或特征。
薄层色谱（TLC）的成分
TLC系统组成部分包括:
- 薄层色谱板,最好是用固定相准备好的:这些是稳定的化学惰性板，其中一薄层固定相应用于其整个表面层。板上的固定相厚度均匀，粒度细小。
- 薄层色谱室-这是用来开发TLC板。该腔保持一个统一的内部环境，以适当的发展斑点。它还防止溶剂的蒸发，并保持过程中无粉尘。
- 流动相,它由溶剂或溶剂混合物组成。使用的流动相应该是无颗粒的，并且对于TLC斑点的适当显影应该是最高纯度的。所推荐的溶剂与样品在化学上是惰性的，是固定相。
- 滤纸,这在流动相中被润湿，放置在室内。这有助于流动相在固定相长度上形成均匀上升。
薄层色谱法（TLC）程序
将固定相均匀地涂在平板上，然后让其干燥并稳定。然而，现在，更常用的是现成的平板。
- 用铅笔在板的底部做一个很薄的标记，以应用样本点。
- 然后，将样品溶液以相等的距离涂抹在线条上标记的点上。
- 将流动相倒入TLC室中，使其位于室底上方几厘米处。
- 将流动相的湿润滤纸放置在腔室内壁上，以保持相同的湿度（并由此避免边缘效应）。
- 现在，将制备有样品斑点的平板放置在TLC室中，使带有样品线的平板一侧朝向流动相。然后用盖子关闭该室。
- 然后将平板浸没，使样品点远高于流动相水平（但不浸没在溶剂中），以便显影。
- 有足够的时间来形成斑点。
- 然后取出盘子，让它晾干。
- 然后，在适当的紫外线室中观察样品斑点，或采用针对给定样品推荐的任何其他方法。
显示薄层色谱板结果的一些常用技术包括
- 紫外光
- 碘染色:在检测碳水化合物时是非常有用的，因为它与碘接触时会变成黑色
- 高锰酸钾染色（有机分子）
- 茚三酮试剂:常用于氨基酸和蛋白质的检测
保留因子（Rf)价值观
- 化合物在TLC上的行为通常用其相对迁移率或Rf值来描述。
- Rf或保留因子是相同条件下每种化合物的唯一值。
- 仅当以下色谱条件也恒定时，化合物的Rf在一个实验到下一个实验中为常数：
- 溶剂系统
- 吸附剂
- 吸附剂的厚度
- 斑点材料的数量
- 温度
- 由于这些因素很难在不同的实验中保持恒定，因此通常会考虑相对射频值。
- “相对Rf”指的是相对于标准报告的值。
- 使用以下方程式计算Rf值：
薄层色谱(TLC)的应用
- 来监测反应的进展
- 识别存在于给定混合物中的化合物
- 测定物质的纯度。
- 神经酰胺和脂肪酸的分析
- 检测食物和水中的农药或杀虫剂
- 法医学中纤维的染料成分分析
- 放射性药品放射化学纯度的测定
- 药用植物及其成分的鉴定
薄层色谱法的优点
- 这是一个简单的过程，开发时间短。
- 它有助于轻松显示分离的化合物斑点。
- 它有助于分离大多数化合物。
- 分离过程更快，对化合物的选择性更高(即使化学上的微小差异也足以实现明确的分离)。
- 给定样品的纯度标准可以很容易地进行评估。
- 这是一种更便宜的色谱技术。
薄层色谱法（TLC）的局限性
- 它不能区分对映体和某些异构体之间的区别。
- 为了识别特定的化合物，必须事先知道感兴趣的化合物的Rf值。
- 薄层色谱板没有长的固定相。因此，与其他色谱技术相比，分离的长度是有限的。
工具书类
- https://owlcation.com/stem/tlc-thin-layer-chromatography-Principle-Procedure
- https://www.utsc.utoronto.ca/webapps/chemistryonline/production/tlc.php
- https://en.wikipedia.org/wiki/Thin-layer_chromatography
- https://chem.libretexts.org/Demos%2C_Techniques%2C_and_Experiments/General_Lab_Techniques/Thin_Layer_Chromatography
- https://www.slideshare.net/LavakusaBanavatu/thin-layer-chromatography-43293607
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