三联糖铁(TSI)琼脂-组成，原理，制备，结果，用途

大多数细菌都能发酵碳水化合物，特别是糖类。其中，每种细菌只能发酵部分糖，而不能发酵其他糖。因此，细菌能发酵的糖和不能发酵的糖是细菌的特性，也是鉴别细菌的重要标准。三糖铁(TSI)琼脂是一种培养基，因其能够测试微生物发酵糖和产生硫化氢的能力而得名。

三糖铁(TSI)琼脂的组成

成分	Gms /升
酪蛋白胰腺消化	15.0
乳糖	10．0
蔗糖	10．0
氯化钠	5．0
动物组织消化系统	5．0
酵母提取物	3．0
牛肉膏	3．0
葡萄糖	1．0
枸橼酸铁铵	0．5
硫代硫酸钠	0.3
酚红	0.024
琼脂	12.0

最终pH值(25°C): 7.3 +/- 0.2

三糖铁(TSI)琼脂的原理

1. TSI琼脂是一种特殊的介质，由多种糖组成的ph敏感染料(苯酚红)，1%乳糖，1%蔗糖，0.1%葡萄糖，以及硫代硫酸钠和硫酸亚铁或硫酸亚铁铵。
2. 当所有这些成分混合在一起并允许以一定角度凝固时，琼脂试管就会倾斜。
3. 这种介质的倾斜形状提供了一系列表面，这些表面在不同程度上暴露在含氧空气中(有氧环境)或不暴露在空气中(无氧环境)，在这种环境下，生物的发酵模式被确定。
4. 三糖铁琼脂的设计目的是根据碳水化合物发酵模式和硫化氢生产的差异来区分生物。
5. 碳水化合物发酵是通过气体的产生和pH值指示器从红色到黄色的颜色变化来表示的。
6. 由于发酵过程中产生酸，pH值下降。酸碱指示剂酚红被用于检测碳水化合物发酵，它是由碳水化合物培养基的颜色在酸的存在下从橘红色变为黄色的变化所指示的。
7. 在蛋白胨氧化脱羧的情况下，碱性产物形成，pH值上升。这是由介质的颜色从橙红色到深红色的变化所表明的。
8. 介质中的硫代硫酸钠和硫酸亚铁铵可检测硫化氢的产生，并由管对接处的黑色表示。
9. 为了便于检测只发酵葡萄糖的生物，葡萄糖浓度为乳糖或蔗糖浓度的十分之一。
10. 在葡萄糖发酵过程中，斜管中少量的酸产生迅速氧化，导致培养基保持橘红色或恢复到碱性ph值。相反，酸反应(黄色)保持在管的尾部，因为它在较低的氧张力下。
11. 在消耗了有限的葡萄糖之后，能够这样做的生物体将开始利用乳糖或蔗糖。

• 碱性/酸性(红色斜面/黄色屁股)反应:这表明只有葡萄糖发酵。
• 酸/酸(黄斜面/黄屁股)反应:它表示葡萄糖、乳糖和/或蔗糖的发酵。
• 碱性/碱性(红斜面，红屁股)反应:无碳水化合物发酵的结果。
• 介质变黑:H存在时发生₂
• 天然气生产琼脂中的气泡或裂纹表明产生了气体(CO的形成)₂和H₂）

制备和使用方法

1. 将64.42克(相当于每升脱水培养基的重量)悬浮在1000毫升纯化蒸馏水中。
2. 加热至沸腾，使介质完全溶解。
3. 混合均匀，并分配到试管中。
4. 灭菌保持在10磅压力(115°C) 30分钟或按验证周期。
5. 让培养基以2.5厘米长的斜面形式凝固。
6. 用一根笔直的接种针，触摸一个隔离良好的菌落的顶部。
7. 接种TSI，首先刺穿培养基的中心到管的底部，然后在斜面琼脂表面划条纹。
8. 盖上盖子，在35°-37°C环境空气中孵育管18 - 24小时。
9. 检查介质的反应。

三糖铁(TSI)琼脂的结果解释

图片来源:Microrao

生物	增长
沙门氏菌血清	经济增长;红色斜面，黄色屁股，气体阳性，黑色屁股(H2生产)
大肠杆菌	经济增长;黄色斜面，黄色屁股，气体阳性，无H2年代生产的
铜绿假单胞菌	经济增长;红色的斜面，红色的屁股，没有气体，没有H2年代生产的
志贺氏杆菌sonnei	经济增长;红色斜面，黄色屁股，没有气体，没有H2年代生产的
枸橼酸杆菌属freundii	黄斜面，黄屁股，产气;H阳性反应2S介质变黑
肠杆菌属aerogenes	黄斜面，黄屁股，产气;没有H2年代生产的
肺炎克雷伯菌	黄色斜面，黄色屁股，气体阳性，无H2年代生产的
变形杆菌属寻常的	红斜黄臀，无产气;H2年代生产的
沙门氏菌甲型副伤寒	红斜黄臀，产气;没有H2年代生产的
沙门氏菌伤寒	红斜黄臀，无产气;H2年代生产的
沙门氏菌沙门氏菌感染	红斜黄臀，产气;H2年代生产的
弗氏志贺菌	红色斜面，黄色屁股，气体负值，H2不生产

三糖铁(TSI)琼脂的用途

• 它被用来测定生物发酵葡萄糖、乳糖和蔗糖的能力，以及它们产生硫化氢的能力。
• 它主要用于区分肠杆菌科的成员与其他革兰氏阴性杆。
• 它也被用于区分肠杆菌科的糖发酵模式的基础上。

三糖铁(TSI)琼脂的局限性

• 建议对来自纯培养的菌落进行生化、免疫、分子或质谱检测以进行完全鉴定。
• 刺伤媒体的屁股是很重要的。没有刺到屁股，测试无效。刺刺时必须保持琼脂的完整性。在测试过程中必须松开瓶盖，否则会出现错误的结果。
• TSI琼脂必须在规定的18-24小时潜伏期内进行阅读。如果过早阅读，可能会观察到假阳性反应。如果阅读时间超过24小时，可能会观察到假阴性反应。
• 产生硫化氢的生物体可能会掩盖培养基尾部的产酸过程。然而，硫化氢的生产需要酸性环境，因此应该认为对接部分是酸性的。
• TSI在检测硫化氢方面不如其他含铁介质(如硫化物)灵敏吲哚运动性(SIM)媒介。
• 某些物种或菌株可能产生延迟反应或完全不能以规定的方式发酵碳水化合物。

参考文献

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7. http://www.himedialabs.com/TD/MM021.pdf