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什么是醋酸盐利用率测试？
醋酸盐利用率测试是通过评估其利用生长培养基中存在的醋酸盐的能力来鉴定有氧生物的生物化学试验之一。
- 醋酸盐利用率试验的原理基于生物体利用醋酸作为唯一碳源的能力。
- 该测试类似于乙酰酰胺利用率测试和其他此类测试有助于在其代谢活动的基础上有助于鉴定特定的生物组。
- 通常进行醋酸盐利用率测试以区分志贺丽来自肠杆菌的其他成员。
- 该测试在分化中特别有效志贺丽从科利作为大多数大肠杆菌可以在大多数物种中使用醋酸志贺丽不能使用醋酸盐。
- 醋酸酯利用率测试也是分化发酵和氧化生物的方法之一。
- 乙酸盐的利用导致培养基的pH的变化，然后导致培养基中使用的pH指示剂的颜色的变化。
- 醋酸盐利用率测试类似于柠檬酸盐利用试验或柠檬酸盐试验，不同之处在于培养基具有乙酸盐代替柠檬酸盐作为唯一的碳源。
醋酸盐利用率测试的目标
- 分化氧化酶阴性，非含量和厌氧的革兰氏阴性棒之间，这可能是大肠杆菌或者志贺丽。
- 将乳糖 - 非发酵，革兰氏阴性微生物分化为来自发酵细菌。
醋酸盐利用率测试原理
- 醋酸琼脂是生化试验中使用的培养基，以确定有机体利用醋酸酯的能力。类似柠檬酸盐和乙酸盐的有机酸已被广泛用作分化肠杆菌族家族成员的方法。
- 这些细菌中的大多数能够在有机氮存在下利用有机酸。
- 乙酸盐介质含有无机铵盐作为氮气源以及乙酸盐作为碳源。
- 培养基生物体的生长表明醋酸盐利用的阳性测试。细菌的醋酸盐的代谢之后是将铵盐分解成氨。
- 然后释放氨并增加培养基的pH。pH的变化将培养基中的溴硫醇蓝指示器从绿色到蓝色。
- 推荐在差异化的情况下志贺丽从大肠杆菌。
- 大约84％的大肠杆菌菌株利用醋酸盐，而大多数志贺氏菌和蛋白质物种则无法乙酸盐使用。
用于醋酸酯利用率测试的介质和试剂
1.使用的媒体
- 乙酸盐利用率测试中使用的介质是含有乙酸钠的生长培养基作为唯一的碳源。
- 乙酸琼脂培养基的组成如下：
| S.N. | 原料 | 克/升 |
| 1。 | 氯化钠 | 5.0 |
| 2。 | 硫酸镁 | 0.1 |
| 3. | 磷酸铵，单卤素 | 1.0 |
| 4. | 磷酸钾，二元 | 1.0 |
| 5。 | 醋酸钠 | 2.0 |
| 6。 | 细菌芸香 | 20.0 |
| 7。 | 菠萝蛋白蓝色 | 0.08 |
| 最终pH在25°C：6.7±0.2 | ||
| 将2°C储存至8°C。 | ||
醋酸琼脂也可商购，可能具有不同的组成。
| S.N. | 原料 | 克/升 |
| 1。 | 动物组织的消化物消化 | 5.0 |
| 2。 | 麦精 | 5.0 |
| 3. | 酵母抽提物 | 5.0 |
| 4. | 葡萄糖 | 5.0 |
| 5。 | 聚山梨醇酯80（吐温80） | 10.0 |
| 6。 | 细菌琼脂 | 20.0 |
| 7。 | 醋酸钠 | 27.220 |
| 最终pH在25°C：5.4±0.2 | ||
2.使用的用品
- 无菌接种环或棍子。
- 无菌移液器
- 在35°C时孵化器
- 无菌盐水
醋酸盐利用率测试
1.培养基
- 在烧杯中，将69.1克脱水粉末或实验室制备的介质加入到1000毫升的蒸馏水中。
- 然后将悬浮液加热至沸腾以完全溶解培养基。
- 然后将溶解的介质分配到管中，并在15磅压力（121℃）的高压釜中灭菌15分钟。
- 一旦自动灭菌过程完成，将管取出并在倾斜位置冷却至约40-45℃的温度。应保持该位置以获得1.5-2.0cm深度的烟头。
2.利用测试
- 孤立的殖民地采用18-24小时的培养物，含有无菌接种针。
- 相反，可以通过使用非抑制板的18至24-h培养来制备浑浊的盐悬浮液。
- 通过从培养板拾取的光移植物或盐水悬浮液拾取的光接种液来接种乙酰胺琼脂管。应使用环路或接种棒来回倾斜，倾斜。
- 应放松试管盖，以确保足够的通气。
- 然后将管在35-37℃下孵育至多7天。在35-37℃下孵育长达5天，对于肠杆菌薄膜，不足，但建议在30℃下孵育7天，以进行纯革兰根负棒。
- 试管应每天检查4天，再次在7天内再次丢弃结果为负。
结果解释醋酸盐利用率测试
图：醋酸盐利用率测试结果。图像来源：Bailey和Scott的诊断微生物学。elewsvier。
- 积极的测试由生长和从绿色变为沿着倾斜的强烈蓝色表示。
- 负面测试由没有增长，没有颜色变化，倾斜剩余绿色。
控制细菌
- 作为醋酸盐利用率测试的质量控制的一种形式，可以将两种不同的生物体作为正和阴性对照。
| 控制 | 孵化 | 结果 |
| 大肠杆菌 | 有氧孵育24-48小时，33-37°C。 | 醋酸阳性（生长;强烈的蓝色） |
| Shigella Flexneri. | 有氧孵育24-48小时，33-37°C。 | 醋酸盐阴性（没有生长;绿色） |
醋酸盐利用率测试的用途
- 醋酸酯利用率试验用于测试生物体利用醋酸盐作为唯一碳源的能力。
- 它还用作将革兰氏阴性细菌分化到细菌发酵和氧化组中的定性测试。
- 醋酸琼脂也用作分离的选择性培养基大肠杆菌。
醋酸盐利用率测试的局限性
- 没有伴随的颜色变化的斜率上的生长可能表明阳性测试。但是，如果琼脂在进一步孵育时没有变蓝，则应用较少的接种物重复测试。
- 应重复常规结果的测试。
- 当测试需要有氧环境时，不应刺伤倾斜。
- 由于培养培养物的培养基，接种物不应从肉汤培养中取出。
- 应采取轻质接种物以防止来自先前介质的物质的携带。
参考资料和来源
- 醋酸琼脂。M1225。Hamedia实验室。
- 生物化学检验鉴定有氧细菌。（2016）。临床微生物程序手册，3.17.1.1-3.17.48.3。DOI：10.1128 / 9781555818814.ch3.17.1
- Bergman JM，Wrande M，Hughes D（2014）醋酸盐可用性和利用率支持突变体群对老化细菌菌落的生长。PLOS一个9（10）：E109255。https://doi.org/10.1371/journal.pone.0109255.
- Trabulsi lr，ewing wh。1962.乙酸钠培养基，用于区分志贺氏菌和大肠杆菌培养物。公共卫生实验室20：137-140。
- Bailey和斯科特的诊断微生物学。elewsvier。