吲哚试验-原理，介质，程序，类型，结果，用途

吲哚试验的定义

吲哚试验是对细菌物种进行的生化试验，以检测它们在一组称为“色氨酸酶”的酶存在下从色氨酸产生吲哚的能力。

• 它是检测色氨酸转化为吲哚的定性试验。
• 测试是作为IMVIC试验的一部分进行的，用于区分肠杆菌痤疮家族的成员。
• 它在鉴定不同的细菌中是重要的大肠杆菌，变形杆菌，摩根菌等
• 它在大肠菌群的特征鉴定中起着中心作用，这可以从吲哚试验的各种变化和与其他生化试验的结合中看出。
• 它仍然是一种传统的方法来区分吲哚阳性大肠杆菌从吲哚阴性肠杆菌和Klebsiella.．
• 当必须对非发酵罐和厌氧菌进行测试时，则使用一种叫做埃利希试剂(用乙醇代替异戊醇)的测试。

吲哚测试的目标

• 检测色氨酸通过酶促作用生成吲哚。
• 尤其是肠杆菌菌的分辨大肠杆菌从肠杆菌和克雷伯氏菌。

微生物测试

• 在不含染料的介质上的革兰氏阴性棒的新增生长并含有色氨酸，例如弯曲或康复。
• 厌氧革兰氏棒。
• 厌氧革兰氏阴性棒。

吲哚试验原理

生物体从氨基酸色氨酸分裂吲哚的能力是由于色氨酸酶的存在。色氨酸是在酶色氨酸酶的存在下经历脱核和水解的氨基酸。色氨酸的还原脱胺导致通过中间分子生产吲哚吲哚丙酮酸。在脱氨过程中，色氨酸酶催化氨基(- nhh)的去除₂）来自色氨酸分子。酶需要吡哆醛磷酸盐作为辅酶。催化反应的最终产物为吲哚、丙酮酸、氨₄⁺）和能量。吲哚，如果存在，将与试剂中的醛结合，以产生粉红色的红紫奎因化合物（苯甲醛试剂）或蓝色至绿色（肉桂醛试剂）。吲哚与Kovac的试剂（盐酸和氨基醇中的对二甲基氨基苯并醛）结合，形成黄色或樱桃红着色。戊醇是水不溶性的，因此在肉汤的顶部形成红色的油性层。在快速点测试中，直接从富含色氨酸的中殖民地中生长的菌落检测吲哚。吲哚与在酸pH下存在于滤纸上的对二甲基氨基醌醛醛（DMACA），以产生蓝绿色化合物的蓝色。

使用的媒体，试剂和用品

试剂使用

• 现场测试，5%p-dimethylamobenzaldehyde或1％p在10% (v/v)浓盐酸中制备二甲氨基葡萄糖醛。
• 对于管式法，科瓦克试剂用于好氧生物，埃利希试剂用于厌氧菌和弱吲哚生产者。

科瓦克试剂

成分	浓度
p-dimethylaminobenzaldehydre	50克
盐酸	250毫升
淀粉醇	750毫升

• 与该试剂一起使用的培养基是含有色氨酸，运动 - 吲哚喹啉琼脂或硫化物 - 吲哚 - 运动琼脂（SIM）的肉汤。

埃利希试剂

成分	浓度
p-dimethylaminobenzaldehydre	1克
盐酸	20毫升
酒精	95毫升

• 与EHRLICH的试剂一起使用的培养基是心脏输注或厌氧培养基与色氨酸。

供应用

• 接种用无菌环、棉签或棒子
• 滤纸(可选)

吲哚试验程序

A.快速点测试

• 取一张滤纸，用试剂湿润。
• 用接种环将18-24小时培养中分离良好的菌落擦拭在潮湿的滤纸上。
• 然后观察到颜色的外观。

B.管试验

• 试管中的肉汤培养基或琼脂培养基用从18-24小时培养中取的菌落刺入。
• 对于液体介质，将一小部分接种肉汤拍摄在单独的管中。
• 然后试管在37°C孵育24小时。
• 对于Kovac的试剂，三滴Kovac的试剂加入管的一侧，并且在弯月面观察到颜色变化。
• 对于埃利希试剂，向试管中加入0.5 ml二甲苯并倒置使其充分混合。此外，在管的下面加入六滴埃利希吲哚试剂，在二甲苯层下面可以观察到颜色。

结果吲哚试验解释

答:抽查

• 在20秒内开发蓝色表示吲哚的存在。
• 阴性结果是指没有颜色或在滤纸上出现轻微的粉红色。

图：发现吲哚试验。图像来源：VetBact．

B.管试验

• 在试剂和培养基之间接触点的试剂中形成粉红色着色（樱桃红环）表明阳性结果。
• 没有颜色或略微黄色的外观表明否定结果。

图：吲哚测试。图像来源：贝利和斯科特的诊断微生物学。爱思唯尔。

吲哚测试的用途

• 吲哚试验是用来测试生物体利用色氨酸和产生吲哚的能力。
• 作为IMViC测试的一部分，该测试用于区分肠杆菌科的成员。
• 这个测试也能区分变形杆菌从其他普罗透斯物种。
• 这个测试区分吲哚阳性大肠杆菌从吲哚阴性肠杆菌和克雷伯氏菌。
• 测试进一步区分K．肺炎(吲哚阴性)k . oxytoca(吲哚阳性)和枸橼酸杆菌属freundii(吲哚阴性)枸橼酸杆菌属koseri(吲哚阳性)。

吲哚试验的局限性

• 可检测到的吲哚会扩散到2- 3毫米菌落5毫米内的菌落，产生假阳性结果。
• 含有染料的介质(例如，循证不应使用Mac）。
• 生长培养基必须含有足量的色氨酸。不要使用Mueller-hinton agar对于测试，因为在酪蛋白的酸水解过程中被破坏色氨酸。
• 只有肉桂醛试剂可用于厌氧微生物的现场测试。它是一种更敏感的试剂，但它不太稳定。
• 不要使用带有硝酸盐盘的平板进行吲哚测试，因为硝酸盐会通过诱导假阴性结果干扰点吲哚测试。
• 如果快速吲哚试验是阴性的，则在更敏感的管试验中，分离物可能是正的。用二甲苯提取是最敏感的测试。二甲苯替代品敏感。
• 对于挑剔的革兰氏阴性菌，如c . hominis沉重的接种和提取是必要的。

引用和来源

• 需氧细菌鉴定的生化试验。（2016）.临床微生物程序手册，3.17.1.1-3.17.48.3。DOI：10.1128 / 9781555818814.ch3.17.1
• Maria P. MacWilliams。2009.吲哚测试协议。
• Kovac的吲哚试剂R008。HiMedia实验室。
• 5%——https://asm.org/getattachment/200d3f34——c75e - 4072 a7e6 df912c792f62/indole -测试-协议- 3202. - pdf
• 3%——https://microbiologyinfo.com/indole-test-principle-reagents-procedure-result-interpretation-and-limitations/
• 2％ - https://himedialabs.com/td/r008.pdf
• 2％ - http://universe84a.com/indole-test-introduction/
• 1%——https://en.wikipedia.org/wiki/Indole_test
• 1%——https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/IndoleTestRgnts.htm