吕弗勒介质

• 吕弗勒介质是吕弗勒在1887年开发的原始公式的修改。
• 吕弗勒培养基提高了挑剔病原微生物的一级和二级分离和培养，特别是来自鼻和喉的病原微生物。
• 它还能恢复由于长时间培养或重复传代而丧失的毒力和其他识别特性(微观和菌落)。
• 高血清含量有助于确定微生物的蛋白水解活性。它也用于显示色素沉着和子囊孢子。

吕弗勒介质的组成

成分	Gms /升
眎蛋白胨	2.5通用
葡萄糖	2.5通用
氯化钠	1.25通用
牛肉膏	2.5通用
马血清	750.0毫升

最终pH(25°C): 7.6 +/- 0.3

吕弗勒介质原理

培养基中含有马血清、牛肉提取物、葡萄糖和蛋白胨，它们共同提供支持生长所需的复杂氮物质和营养物质白喉杆菌．加入氯化钠提供必需离子。

葡萄糖是可发酵碳水化合物的来源。在灭菌过程中，血清使培养基凝固，是棒状杆菌和其他生物代谢蛋白质的来源。

亚甲基蓝染色可见，培养基促进异色颗粒的形成。颗粒的形成显示了典型的细胞形态c . diphtheriae．

吕弗勒培养基的制备及使用方法

1. 将8.75克悬浮在250毫升蒸馏水中。
2. 完全溶解介质并在10磅压力(115°C)下用高压灭菌20分钟。
3. 冷却至50-55°C，并无菌添加750毫升无菌马血清。
4. 充分混合并无菌分配到无菌管中。
5. 在80-85°C的自由流动蒸汽中浓缩2小时，连续至少3天对介质进行灭菌。
6. 在接种前，让培养基平衡到室温。
7. 采用鱼尾运动，将标本拭子直接接种到培养基上。
8. 35ºC有氧培养。持续4天。
9. 每天观察典型的菌落形态
10. 用亚甲基蓝染色检查是否有异色颗粒和细胞形成汉字的外观。
11. 明确的识别c . diphtheriae是通过进行生化和毒性试验制成的。

用于好氧微生物的蛋白质水解检测

1. 用该生物体的分离菌落接种培养基。
2. 在35ºC有氧培养3-4天。
3. 观察典型的菌落形态。

用于厌氧微生物的蛋白质水解检测

1. 用该生物体的分离菌落接种培养基。
2. 在35ºC厌氧培养。3 - 4天或在孵育前用硫代乙醇酸肉汤覆盖接种斜面，拧紧盖子并进行有氧孵育。
3. 观察典型的菌落形态。

结果吕弗勒介质解释

• 的增长棒状杆菌属种在吕弗勒培养基上表现为棒状杆菌属种显示异色颗粒和外观提示汉字形成亚甲基蓝染色。
• 蛋白质水解表现为菌落的出现，菌落被液化介质的小坑包围，或斜面的液化产生腐臭。

生物	增长
白喉杆菌	经济增长;微小的、米色的菌落，中心略隆起;亚甲基蓝染色可见异色颗粒
棒状杆菌属pseudodiptheriticum	经济增长;微小的奶油色菌落
铜绿假单胞菌	良好的增长;蛋白质水解的绿色菌落
金黄色葡萄球菌	良好的增长;黄到金的殖民地
酿脓链球菌	公平才能好成长;non-proteolytic

吕弗勒介质的使用

• 吕弗勒培养基的主要价值在于该属成员的生长和形态特征棒状杆菌属．这种配方增强了生物细胞内异色颗粒的形成。
• 由于其血清含量高，吕弗勒培养基可用于微生物蛋白水解活性的测定。
• 培养基的灰白色表面为菌落色素沉着的检测和观察提供了良好的背景。
• 如果所有的外部湿气都被无菌地从斜面上除去，并且斜面的上部被加热直到斜面破裂，这种培养基可以用来检测子囊孢子。

吕弗勒介质的局限性

• 建议对纯培养的菌落进行生化、免疫学、分子或质谱检测以进行完全鉴定。
• 推荐选择培养基和非选择培养基与吕弗勒培养基平行接种进行分离c . diphtheriae；建议使用碲酸钾、胱氨酸琼脂和血琼脂来提高回收率。
• 优化采收率c . diphtheriae，应在采集标本时获得鼻咽和咽喉标本。
• 微观形态的变化可能因大量的吕弗勒介质而不同。
• 革兰氏阳性微生物棒状杆菌属在吕弗勒培养基上生长可产生异色颗粒。
• 检测某些微生物的蛋白质水解可能需要超过推荐的4天的潜伏期。

参考文献

1. https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/LoefflerMedium.htm
2. http://himedialabs.com/TD/M537.pdf
3. http://www.quelab.com/htmleng/2084a.html
4. https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/manuals/IFU61288.pdf
5. http://legacy.bd.com/ds/technicalCenter/inserts/L007463 (07) (0107) . pdf