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哥伦比亚琼脂加5%羊血是一种用于从具有公共卫生重要性的各种临床标本和非临床标本中分离和培养非挑剔和挑剔微生物的高营养通用培养基。哥伦比亚血琼脂于1966年由埃尔纳等人首次描述，他们将动物源性纳入其中蛋白胨，酪蛋白的酶消化，以及通过在一个培养基中加入去纤维羊血而富集的培养基。研究发现，它是一种改良的血琼脂，既能促进繁茂生长，又能促进色素生产，具有典型的菌落形态和清晰的溶血反应。
用5%羊血制备哥伦比亚琼脂
| 酪蛋白胰腺消化 | 12.0克 |
| 动物组织消化系统 | 5.0克 |
| 酵母提取物 | 3.0克 |
| 牛肉膏 | 3.0克 |
| 玉米淀粉 | 1.0克 |
| 氯化钠 | 5.0克 |
| 琼脂 | 13.5克 |
| 羊血,去纤维蛋白的 | 5%(50毫升) |
pH 7.3±0.2在25°C
哥伦比亚琼脂加5%羊血的原理
这种培养基含有蛋白胨，提供氮、碳、维生素，以及细菌生长所必需的微量元素。酵母提取物是维生素B复合物的供应者。玉米淀粉作为生物体的能量来源，也通过吸收样品中含有的有毒副产物来中和有毒代谢物。氯化钠是补充电解质，维持渗透平衡。添加羊血以显示溶血反应，并提供许多致病物种生长所需的X因子(血红素)。在这种培养基上，菌落往往比在含有其他血琼脂基质的培养基上更大，生长更茂盛。
5%羊血制备哥伦比亚琼脂
哥伦比亚琼脂底物的制备
- 向蒸馏水/去离子水中加入组分，将体积调至1.0L。
- 彻底混合。
- 轻轻地加热直到沸腾。
- 高压灭菌15分钟，压力为15psi - 121°C。
- 冷却至45°-50°C。
5%羊血制备哥伦比亚琼脂
- 在950.0mL冷却无菌哥伦比亚琼脂基础上，无菌加入50.ml无菌去纤维羊血。
- 彻底混合。
- 倒入无菌培养皿或分配到无菌管。
结果用5%羊血对哥伦比亚琼脂进行分析
| 生物 | 菌落特征 |
| 链球菌(非团体D) | 小的，白色到灰色。 β或α溶血 |
| Enterococci (D组) | 小，但比A组链球菌大，呈灰色。 (很少)溶血 |
| 葡萄球菌 | 大，白色到灰色或奶油色到黄色，有溶血或不溶血 |
| 棒状杆菌 | 从小到大，白色到灰色或黄色，有溶血或不溶血 |
| 单核细胞增多性李斯特氏菌 | 小至中型，淡灰色，轻度溶血 |
| 肠杆菌科 | 中型至大型灰色菌落，伴溶血或不伴溶血 |
| 假丝酵母物种 | 小,白色的殖民地 |
哥伦比亚琼脂与5%羊血的使用
- 哥伦比亚血琼脂被推荐作为一种常用的初级分离培养基，用于分离非挑剔的和挑剔的微生物从临床标本。
- 它是一种主要的分离培养基，大多数微生物，如肠杆菌科，假单胞菌,和其他非发酵革兰氏阴性菌，链球菌，肠球菌，葡萄球菌，棒状杆菌，假丝酵母物种，许多其他物种将会生长。
哥伦比亚琼脂与5%羊血的局限性
- 建议对来自纯培养的菌落进行生化、免疫、分子和质谱检测以进行完全鉴定。
- 这种培养基缺乏V因子(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD)，因为绵羊血液中含有NADase，它会破坏NAD。因此,流感嗜血杆菌同时需要X和V因子的，将不会在这种介质上生长。
- 淋病奈瑟氏菌在这种培养基上生长不好。
- 该培养基不适合隔离生长分枝杆菌、军团菌、博代氏杆菌属以及其他具有高度特殊营养需求的生物。
- 由于哥伦比亚琼脂中碳水化合物(淀粉)含量相当高，溶血性链球菌可能会出现α而不是β溶血反应，或可能在基于该配方的培养基上出现弱溶血反应。
参考文献
- Ronald M. Atlas和James W. Snyder(2014)。临床和公共卫生微生物媒介手册。CRC出版社。泰勒和弗朗西斯集团有限责任公司，第148-149页。
- 正欲
- Himedia
- 哈代诊断
- 热费舍尔