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氧化发酵(of)试验的目的
根据氧化或发酵特定碳水化合物的能力来区分微生物。
原则氧化发酵(of)试验
碳水化合物是一种有机分子,含有碳、氢、和氧的比例(CH2O)n。生物体使用碳水化合物的方式取决于它们的酶补体。发酵的模式是某些物种、属或生物群的特征,因此,这一特性已被广泛用作一种发酵方法微生物的生化鉴别方法。葡萄糖进入细胞后可以进行有氧分解,其中分子氧可以作为最终的电子受体指示氧化代谢,也可以进行厌氧分解,其中除氧之外的无机离子,例如NO3¯或SO4¯可以作为最终的电子受体指示发酵代谢或有氧和厌氧两种途径,一些生物缺乏通过这两种途径氧化葡萄糖的能力。碳水化合物发酵的代谢最终产物可以是有机酸(乳酸、甲酸或乙酸)或有机酸和气体(氢或二氧化碳)。
一个氧化发酵试验用于确定生物体是否使用碳水化合物底物产生酸的副产物。非发酵性细菌通过六种碳水化合物(葡萄糖、木糖、甘露醇、乳糖、蔗糖和麦芽糖)产生酸的能力进行常规测试。生物是氧化的还是发酵的,可以用Hugh和Leifson的培养基来确定,通常称为OF培养基,其中含有色氨酸和溴百里酚蓝(指示剂)。两根试管用于of测试的解释。两者都被接种,其中一管被矿物油覆盖,产生厌氧环境。的微生物的生长在这种介质中,要么利用色氨酸,导致碱性反应(深蓝色))或利用葡萄糖,从而产生酸(将溴百里酚蓝色变成黄色)。酸的生产在覆盖管和开放管导致颜色的变化,这是一个发酵的迹象。开管中酸的产生和颜色的变化是氧化的结果。
测试中使用的介质
休和莱弗森的媒介:蛋白胨2.0gm/L,氯化钠5.0gm/L,磷酸二钾0.30gm/L,葡萄糖10.0gm/L,溴百里香酚蓝0.030gm/L,琼脂3.0gm/L,终pH(25°C) 7.1±0.2
过程氧化发酵(of)试验
- 用一根直线刺入两管of培养基中,使之含有有机物。
- 将液体石蜡倒在介质上,在其中一个管中形成一层大约一厘米深的层。
- 将试管在35-37°C孵育24-48小时。
- 检查打开和关闭的管子颜色的变化。
结果解释氧化发酵(of)试验
氧化:黄色只在开管。
发酵:开管和闭管均呈黄色。
限制氧化发酵(of)试验
- OF培养基是一般用途的培养基,可能不支持挑剔的生物的生长。
- 生长缓慢的生物体可能要几天才能产生结果。
质量控制
生物 | 生物体的性质 | 好氧发酵 | 厌氧发酵 |
大肠杆菌写明ATCC 25922 | 发酵 | 产酸(黄色),正反应 | 产酸(黄色),正反应 |
铜绿假单胞菌写明ATCC 27853 | 氧化 | 产酸(黄色),积极的反应 | 不变(绿色)或碱性(蓝色),阴性反应 |
参考文献
- 2014年下午。贝利和斯科特的诊断微生物学,13版,Mosby, Inc.,爱思唯尔公司的附属公司,3251 Riverport Lane,圣路易斯,密苏里州63043
- Aneja K.R. 2003。微生物学、植物病理学和生物技术实验,第四修订版,新时代国际(P)有限公司,德里达里干吉安萨里路-110002。