蛋白质蛋白质

伯脲测试是什么？

蛋白质是成千上万的氨基酸形成的复合物。氨基酸是两性电解质，其羧基和氨基的作用类似酸和碱。它有一个正电荷和一个负电荷，因此这些离子是电中性的，不会在电场中迁移。这两个氨基酸在肽键的帮助下连接在一起，生成二肽。当水分子被去除时，一个氨基酸的α氨基和另一个氨基酸的α羧基之间就形成了这种键。肽键的形成称为缩合反应。类似地，由两个肽键连接在一起的三个氨基酸被称为三肽，当链拉长时，它被称为多肽。双缩脲是尿素在1800℃加热时形成的化合物，它导致2分子尿素的缩合。缩二脲中的肽键对测试给出了阳性结果，因此这种试剂被命名为缩二脲。它被认为是具有两个或多个肽(CO-NH)键的化合物(蛋白质和肽)的通用测试。

目标

• 检测给定溶液中的蛋白质。
• 来证明肽键的存在。

双缩脲试剂原理（如何缩二脲测试工作？）

缩二脲的测试是用来确定一个肽键中的物质存在下的化学测试。它是基于缩二脲反应，其中，当与碱性硫酸铜处理过的含至少两个肽链的肽结构产生紫色。在碱性溶液中的存在，蓝色的铜离子II可以形成复合物与肽键，因为所述肽具有在氮气和水的氧未共享电子对。有色配位络合物的肽键的Cu2 +的离子和羰基氧（> C = O）和酰胺氮（= NH）之间形成。一旦这个复杂的已经形成，溶液变为从蓝色到紫色。越深紫色，较高是肽 - 铜配合物的数量。发生在含有至少两个H 2 N-C，H 2 N-CH 2 - ，H 2 N-CS-任何化合物的反应或类似的基团直接或通过碳原子或氮原子连接在一起。一种铜离子是由坐标键可能链接到6个附近的肽键。颜色的强度直接正比于本是分子中存在的反应体系中的蛋白质的数量和反应还蛋白质分子中的肽键的数目。

缩二脲试剂是氢氧化钠（NaOH）或氢氧化钾（KOH），水合硫酸铜，和酒石酸钠钾组成的溶液。氢氧化钠和氢氧化钾提供碱性介质和酒石酸钠钾被加入到螯合因而在溶液稳定二价铜离子或以维持其在碱性溶液中的溶解度。

双缩脲试剂程序

• 取3根干净干燥的试管。
• 加入1-2毫升的试验溶液中，卵清蛋白，和去离子水在各个试管中。
• 在所有试管中加入1-2毫升缩脲试剂。
• 摇匀并允许混合物静置5分钟。
• 观察任何颜色变化。

双缩脲试剂结果

观察	解释
无颜色变化，即溶液保持蓝色	蛋白是不存在（阴性缩二脲试验）
溶液变成从蓝色变为深紫色	蛋白存在（阳性缩二脲试验）

缩二脲试验使用

1. 它可以用来检测尿液中的蛋白质含量。
2. 与蛋白质双缩脲反应是适用于通过分光光度分析定量测定总蛋白。

参考文献

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