糖发酵试验

表的内容

介绍

碳水化合物是含有碳，氢和氧的有机分子，其比例（CH 2 O）n。基于它们的结构和碳原子数存在三种类型的碳水化合物，它们是单糖（含有3-7个碳原子的简单糖），二糖（包含通过糖苷键连接在一起的两种单糖），多糖（含有8个或更多单糖分子）。通过分解代谢的方法释放能量，指的是复合有机分子的分解。来自复合物到简单形式的碳水化合物的化学分解能力由大量的细菌，真菌和酵母中具有。然而，根据生物体的酶系统，利用碳水化合物及其分解是不同的。发酵的模式是某些物种，属或生物组的特征。由于这个原因，发酵反应的性质已被广泛地用作微生物生化分化的方法。

糖发酵试验的目的

证明微生物发酵碳水化合物和生产有机酸终产物的能力。
确定微生物在发酵过程中产生气态最终产物的能力。

碳水化合物发酵试验原理

碳水化合物发酵是微生物以ATP的形式产生能量的过程，ATP是生物体的最终能量来源。葡萄糖进入细胞后可以通过有氧代谢(在O2存在下)，分子氧作为最终电子受体(氧化途径)，也可以通过厌氧代谢(在O2不存在下)，无机离子作为最终电子受体(发酵途径)。碳水化合物发酵的代谢最终产物可以是有机酸(乳酸、甲酸、醋酸)或有机酸和气体(氢或二氧化碳)。在厌氧条件下，微生物对碳水化合物(单糖、双糖、多糖)进行发酵降解，该发酵管包括用于检测产气的达勒姆管。发酵培养基由含有特定碳水化合物(葡萄糖、蔗糖或纤维素)的基础培养基和pH指示剂(酚红、安德拉德指示剂或溴甲酚)组成。当生物体发酵碳水化合物时，得到有机酸产品(乳酸、甲酸或醋酸)，使培养基pH值降低(酸性-低于pH值6.8)，呈黄色。发酵管pH指示剂的变化和达勒姆管产气量的变化指示了产生酸性终产物和气体的代谢反应。颜色的变化只有在产生足够量的酸时才会发生并且是可见的，因为细菌可能利用蛋白胨产生碱性副产品。蛋白胨在肉汤中的降解可能导致碱性最终产品的生产，这将改变肉汤的颜色，经常在管的顶部粉红色。

碳水化合物发酵试验程序

碳水化合物发酵液的制备

称重并溶解胰蛋白酶，氯化钠和100ml蒸馏水中的酚红，并转移到锥形烧瓶中。
在所有的烧瓶中加入0.5%到1%的所需碳水化合物。
将倒进的Durham管插入所有管中，达勒姆管应完全充满肉汤。
在115°C的高压灭菌器中灭菌15分钟。(注意:不要过热酚红碳水化合物发酵液。过热将导致分子分解，形成具有特定颜色和味道的化合物。这个过程被称为糖的焦糖化(糖的褐变)。
将糖转移到螺旋封端的管或发酵管中并正确标记。

将细菌培养物接种到发酵培养基管中

在无菌条件下，用1滴18小时或24小时的培养液接种每根试管(未接种的试管作为对照管)。
在37℃下在18-24小时孵育管
检查酸和天然气生产的管。

碳水化合物发酵试验结果与解释

图:碳水化合物发酵试验结果。图片来源:Quizlet Inc.

观察	结果	解释
媒体改变了黄色	酸生产	生物发酵给定的碳水化合物并产生有机酸，从而将培养基的pH降低到酸性条件中。
介质变黄，在达勒姆管中产生气体	酸和天然气生产	生物发酵给定的碳水化合物并产生有机酸和气体。通过倒的Durham管中的小气泡存在来检测气体生产。
没有变化颜色（保留红颜色）	没有发酵的	生物体不能利用碳水化合物，但是在培养基中使用其他能源继续在培养基中生长。

预防措施

接种到特定的糖后，对回路进行消毒，以避免与其他糖管交叉污染。
请勿使用具有部分填充或泡沫的Durham管的管。
过度孵育将有助于细菌降解蛋白质，并导致假阳性结果。

限制

如果没有产生酸，24小时后读数可能不可靠。
如果生物脱氨蛋白胨，掩盖碳水化合物发酵证据，不会发生颜色变化或表明碱度的结果。

参考文献

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Aneja K.r.2003.微生物学，植物病理学，生物技术，第四个修订版，新时代国际（P）Limited，Ansari Road，新德里 - 110002。
哈迪诊断
Himedia
Thermofish.

来源

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1%——https://quizlet.com/461568/cellular-respiration-flash-cards/
1％ - https://quizlet.com/45578103/lab-quiz-second-to-last-one-flash-cards/
< 1%, https://quizlet.com/4382643/carbohydrates-flash-cards/
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