微生物实验室一般无菌技术“，

• 无菌技术是为了防止培养物、无菌培养基和其他溶液被有害微生物(如败血症)污染而采取的一套常规措施。
• 虽然这种行动有时被称为"无菌技术"，但该术语只适用于防止任何生物体进入实验室或医疗设备和试剂(例如在手术期间)。
• 由于生物学家的目标是培养微生物或真核细胞而不引入外来生物，无菌技术对于精确和有意义的实验是至关重要的。
• 人们应该永远记住，完全无菌的工作环境是不存在的。
• 然而，有一些简单的、常识性的程序可以减少培养污染的风险。
• 无菌技术控制来自环境的微生物污染培养物的机会，或被处理的微生物污染环境的机会。

无菌技术的例子有:

• 使用前清洁和消毒实验室表面
• 限制文化或媒介不加盖并暴露在空气中的时间
• 尽可能关闭培养皿
• 有效地对与培养物或培养基接触的接种环和其他设备进行消毒
• 避免在培养物或无菌仪器上呼吸。

对于任何无菌技术都要遵循一些一般规则。

• 关好门窗，以减少气流，防止突然移动，以免影响空气流通。
• 在消毒过的表面上转移建议使用乙醇消毒，因为它的作用快。如果工作台表面难以清洁，可在工作台表面覆盖一层较易消毒的坚韧材料。
• 只有当所有的仪器和材料都近在咫尺时才开始操作。
• 尽快完成所有操作，但不要匆忙。
• 船只必须打开尽可能短的时间。
• 当容器打开时，所有的工作都必须在靠近本生灯火焰的地方进行，在那里气流被向上吸引。
• 在打开试管或瓶子时，必须立即用火焰加热瓶口(见下文)，容器尽可能保持水平，以便空气从容器中向外流动。
• 在使用培养皿的操作过程中，限制无菌内表面暴露于空气污染。
• 放入培养物或无菌容器的无菌移液管的部分不得接触或接触其他非无菌表面，如衣服、工作区域表面或瓶/试管外部。
• 所有接触微生物的物品在每次接触微生物之前和之后都必须消毒。这可以是技术团队在完成一项实际工作后(例如，在使用玻璃器皿的情况下)进行准备和清理工作，也可以是工人在实际工作过程中(例如，烧一个电线环)进行清理。

特定的无菌技术

无菌处理

• 用70%的乙醇擦拭双手和工作区域。
• 建议佩戴手套。这将防止在测试过程中任何外来污染物与客户和样品接触。如果不使用手套，在测试前后都需要洗手。
• 在将容器、烧瓶、盘子和盘子放入细胞培养罩之前，用70%乙醇擦拭其外部。
• 避免直接从瓶子或烧瓶中倒入介质和试剂。
• 使用无菌玻璃或一次性塑料移液器和移液器处理液体，每个移液器只使用一次，以避免交叉污染．在使用无菌移液管之前，不要打开包装。把移液管放在工作区域。
• 用完后一定要盖上瓶盖，用胶带封好多孔板，或把它们放在可转卖的袋子里，以防止微生物和空气污染物进入。
• 永远不要打开无菌烧瓶，瓶子，培养皿等，直到你准备使用它的那一刻，永远不要让它开放给环境。你一看完就把盖子还给我。
• 如果你取下一个盖子或盖子，必须把它放在工作台上，把盖子的开口朝下。
• 只使用无菌的玻璃器皿和其他设备。
• 在执行无菌程序时，注意不要说话、唱歌或吹口哨。
• 尽可能快地进行实验，以减少污染。

接种琼脂平板，斜坡和培养物

• 尽可能快地进行培养转移，在最短的时间内将试管和培养皿打开。
• 通常的做法是打开琼脂板远离身体，而不完全移开盖子。
• 当培养皿的盖子可能比正常情况下被移走的时间更长时，工作时要非常靠近本生灯的火焰，以减少污染的机会。
• 如果培养皿经常被真菌孢子污染，应进一步减少感染的机会，并考虑从下面接种培养皿，琼脂表面朝下。通过这种方式，孢子从空气中附着在培养皿上的机会可能会减少。

使用线圈

• 当使用金属丝环时，把金属丝环的手柄贴近顶部，就像你拿钢笔一样，保持一个几乎垂直的角度。这样小指就可以自由地握住瓶盖/瓶塞/试管。它还确保了循环上的任何液体培养物都将流入火焰中。
• 冲销在使用前后，在咆哮的蓝色本生灯火焰中加热到红色的线圈。这确保了污染的细菌孢子被摧毁。
• 燃烧过程应该逐渐加热环的顶端。这是因为在使用它将包含培养物，在快速加热时可能飞溅，并可能释放培养物的小颗粒，形成气溶胶。
• 将金属丝的手柄端置于火焰的浅蓝色圆锥体中。这是火焰中最酷的区域。
• 把剩下的线慢慢向上拉，拉到火焰最炽热的地方——就在蓝色圆锥体的正上方。
• 按住它直到它变红。
• 确保导线的整个长度都能得到足够的加热。
• 让它在空气中冷却几秒钟，然后立即使用。
• 不要把环放下，或挥舞它。
• Re-sterilise循环后立即使用。

使用一个吸管

• 无菌刻度或滴管(巴斯德)用于转移培养物，无菌培养基而且无菌的解决方案。
• 将移液器从容器/包装中取出，取出一端装有棉絮塞的移液器，注意在你需要牢牢握住的时候尽量少接触移液器。
• 奶头。有时把乳头先浸在无菌液体中润滑是有帮助的。
• 拿移液管时要像拿笔一样，但不要抓住乳头。这样你的小手指就可以自由地握住瓶盖/瓶塞/试管，拇指可以自由地控制奶嘴。
• 小心地压下乳头，取适量的液体，以达到所需的量，但不要达到和湿棉絮塞。
• 在液体表面下用移液管尖端挤压奶嘴，会产生气泡，可能导致“吐痰”，从而形成气溶胶。避免这种情况的方法是在把奶头放入液体之前先挤压奶头。
• 然后轻轻地释放压力，直到抽出所需数量的液体，并将移液管尖端从液体中提出来。
• 把多余的东西轻轻倒回去。
• 使用后立即将被污染的移液管放入附近的弃用消毒液罐中。
• 只有当移液器在丢弃罐内时才取出奶嘴，否则培养液滴会污染工作表面。

烧着瓶口和试管

这确保了没有微生物进入容器口污染培养物或培养基。通过瓶口通过火焰产生对流远离开口，并有助于防止污染。火焰的热部分是在内部明亮的蓝色“锥”和容器需要通过火焰移动，而不是在原地。

• 把瓶盖拧松，以便容易取下。
• 用你的左手举起瓶子/试管。
• 取下瓶盖/药瓶/试管的棉絮塞，小指向右手掌心弯曲。(转动瓶子，不要转动瓶盖。)
• 不要放下瓶盖/棉絮塞。
• 通过热的本生灯的火焰前后通过瓶口点燃瓶口/试管。
• 在完成所需的步骤后，例如，取出培养液，用小指更换瓶盖/棉絮塞/试管。保重!瓶子会是热的。(转动瓶子，不要转动瓶盖。)
• 如果棉絮塞部分失去了形状，可以通过向下推棉絮塞的同时慢慢扭转瓶口，更容易将棉絮塞引导回瓶口。

表面消毒

• 对于技术人员，建议使用乙醇消毒，因为它的作用速度快(约5分钟)。技术人员将更有经验，能够处理与乙醇相关的火灾危险。

用于维持无菌条件的工具

本生灯的

• 也许在实验台上创造一个相对无菌环境最简单的方法就是使用一个简单的燃气燃烧器。
• 这种常见的设备燃烧的是一种持续的可燃气体——通常是天然气(甲烷)，这是根据150年前德国化学家罗伯特·威廉·本生(1811-1899)的设计而成的。
• 无菌技术中明火的一个主要目的是在实验台上和周围形成一个热空气锥，以减少悬浮尘埃颗粒上生物的生存能力。
• 本生灯火焰的能力，加热东西非常迅速，也使它成为一个理想的选择，消毒接种环，加热玻璃瓶口，或点燃酒精在培养播散器。
• 本生灯在某些情况下是不实用的，例如，在层流装置中，热量会破坏气流。
• 一个microincinerator可作为替代品使用。它由一个圆形加热元件组成。在环内放置接种环或针将迅速加热和消毒环/针。
• 注意，微焚烧炉不提供点燃的本生灯的其他无菌技术好处。

层流装置

• 层流装置(或罩)是一种复杂的设备，可以进一步帮助防止试剂和生物培养物的污染。
• 使用正确，它为工作空间提供清洁，超滤空气。
• 它还防止室内空气进入工作区域和两者暂停并清除人员引入工作区域的空气污染物。
• 层流罩最重要的部分是一个高效的抑菌过滤器，即HEPA(高效微粒空气)过滤器。
• 通过认证的高效空气微粒过滤器必须以85升/分钟的速度捕获至少99.97%的灰尘、花粉、霉菌、细菌和任何大小为>0.3 μm的空气颗粒。
• 第一个HEPA过滤器是在20世纪40年代由美国原子能委员会开发的，作为曼哈顿计划(原子弹的开发)的一部分，提供了一种高效、有效的方式过滤放射性颗粒污染物。
• HEPA过滤器技术在第二次世界大战后被解密，允许广泛的研究和商业使用。
• 层流罩是许多生物安全级别(BSL)-2实验室的重要组成部分，它们有助于预防传播病毒和一些细菌

参考文献

1. pbf.unizg.hr /内容/下载/ 24827/96881 /版本/…/无菌+ Technique.pdf
2. http://www.nuffieldfoundation.org/practical-biology/aseptic-techniques
3. https://support.hach.com/app/answers/answer_view/a_id/1020204/~/microbiology-guide%3A-introduction-to-aseptic-technique-
4. https://www.thermofisher.com/np/en/home/references/gibco-cell-culture-basics/aseptic-technique.html
5. http://www.austincc.edu/microbugz/aseptic_technique.php