夹心ELISA-步骤和优点|微生物笔记

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三明治ELISA量化两层抗体之间的抗原（即捕获检测抗体）.三明治酶联免疫吸附法是将抗原夹在两种抗体之间而得名。三明治试验使用两种不同的抗体，它们与需要确定浓度的抗原上的不同抗原表位发生反应。

要测量的抗原必须含有至少两种能够与抗体结合的抗原表位，因为至少两种抗体在夹层中起作用。单克隆或多克隆抗体可用作夹心ELISA系统中的捕获和检测抗体。单克隆抗体识别单个表位，允许精细检测和定量抗原的小差异。多克隆通常用作尽可能多地拉下抗原的捕获抗体。

固定数量的一种抗体附着在一系列重复的固体载体上，如塑料微滴度多孔板。将含有未知浓度抗原的测试溶液加到孔中并使其结合。未结合的抗原通过洗涤去除，与酶结合的第二抗体被允许结合。第二种抗体-酶复合物构成了检测的指标体系。抗原起着桥梁的作用，所以测试溶液中抗原越多，酶联抗体就会越多。测试溶液与一系列已知抗原浓度的标准溶液平行使用，作为对照和参考。从标准溶液中得到的结果被用来构建第二抗体作为抗原浓度的函数的结合曲线。抗原的浓度可以从标准溶液的吸光度读数推断出来。

三明治盟友

夹心ELISA用于检测抗原。在该测试中，将已知的抗体涂覆并固定在微量滴定板的孔上。将含有可疑抗原的试验样品加入到孔中，并使允许与孔中的抗体反应。在洗涤井的步骤之后，加入对抗原的不同表位特异的第二酶缀合的抗体，并使其孵育。通过重新洗涤除去任何游离二抗后，加入特定基材，并测量随后的发色反应。然后将显色反应与标准曲线进行比较，以确定测试样品中存在的抗原的确切量。在阳性测试中，酶在基板上作用以产生颜色，并且其强度可以通过分光光度计或ELISA读取器测量。也可以通过肉眼观察颜色的变化。

三明治ELISA的步骤/方法

步骤如下:

准备一个已知数量的捕获抗体被结合的表面。
阻断表面任何非特异性结合位点。
将含抗原的样品加入平板。
洗涤板，使未去克抗原被除去。
加入一个特异性抗体，并与抗原结合(因此形成“三明治”:抗原被卡在两个抗体之间);
添加酶联二抗作为检测抗体，也特异性结合抗体的Fc区域(非特异性)。
清洗平板，使未结合的抗体-酶结合物被去除。
加入能被酶转化成颜色、荧光或电化学信号的底物。
测量板孔的吸光度或荧光或电化学信号(如电流)，以确定抗原的存在和数量。

夹心ELISA优点:

它具有高度的特异性，因为使用两种抗体和抗原/分析物被特异性捕获和检测。
它适用于复杂的样品，因为抗原不需要在测量前进行纯化。
具有良好的灵活性和灵敏度，因为可以使用直接和间接的检测方法。