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胱氨酸胰蛋白酶琼脂(CTA),也被称为胱氨酸胰蛋白酶琼脂,是由Vera开发的一种半固态生长培养基,用于在适当的温度下鉴定和延长微生物的保存时间。它用于检测细菌的运动,添加碳水化合物后,它有助于发酵反应和挑剔微生物的分化,如奈瑟氏菌属,肺炎球菌,链球菌和非孢子形成的厌氧菌。
作文
成分 | GM / L. |
酪蛋白的胰腺消化 | 20.0gm. |
氯化钠 | 5.0通用 |
l -胱氨酸 | 0.5gm. |
亚硫酸钠 | 0.5gm. |
酚红 | 17.0毫克 |
琼脂 | 3.5通用 |
最终pH 7.5 +/- 0.2在25ºC。
注意:此外,含碳水化合物的CTA培养基中含有10.0克指定碳水化合物。
原则
培养基含有胱氨酸和蛋白胨,供应支持缩短微生物生长所需的营养物质。补充有1%浓度的特定碳水化合物的CTA培养基用于检测发酵反应。由于掺入pH指示剂染料,酚红色而通过培养基的可见颜色变化来检测碳水化合物发酵。当存在的碳水化合物通过生物体代谢时,产生有机酸,并且培养基酸化。通过碳水化合物发酵产生的酸导致pH的降低,导致培养基中的颜色移位从红色粉红色到黄色。然而,存在于培养基中的蛋白胨也被存在的细菌降解,并在pH下产生碱性的物质。当通过碳水化合物发酵产生的酸的量大于蛋白胨降解的碱性端环产物,酚红色指示剂从红橙色变为黄色。用酚红色的颜色变化发生在pH 6.8周围,靠近介质的原始pH值。向培养基中添加琼脂允许沿着接种线的刺激检测运动。动机生物从刺线延伸,在整个培养基中产生浊度或浑浊,而非运动生物仅在稳定管线中生长并使周围介质清除。
准备
- 将28.51克悬浮在1000ml蒸馏水中。
- 热量沸腾以完全溶解培养基。
- 在管中分配8-10毫升量。
- 通过在121℃下以15磅压力高压灭菌15分钟进行灭菌15分钟。
- 冷却至50°C并加入适当的碳水化合物。
- 混合良好并允许试管中的介质在直立位置冷却
结果解释
图:HISS培养基(CTA +血清+糖+指示剂(酚红))。图片来源:slideplayer.com
发酵
积极的反应:在培养基的接种区域(刺线)中的黄色变化的发展。
负面反应:媒体中的红色或深红色。培养基中橙色的橙色的生长表明碳水化合物尚未被利用,并且发生了蛋白胨降解。
能动性
积极的测试:浑浊或混浊生长从接种线开始延伸。
负面测试:只沿着刺线生长,留下周围的清晰。
图片来源:HiMedia
用途
- 用于淋球菌等细菌的鉴定和维持。
- 它用于通过尖胎微生物测定碳水化合物发酵。
- 它也用于检测细菌的运动,此外,该基地可以作为一个保持培养基,以维持挑剔的微生物。
限制
- 建议对纯培养的菌落进行生化、免疫学、分子或质谱检测以进行完全鉴定。
- 只有少量的酸可以通过奈瑟氏菌属,因为生物氧化地利用碳水化合物。
- 长时间的孵育可能导致pH指标的变化或与奈瑟菌病原体的乳糖/蔗糖反应异常。
- 有氧孵化是必要的,因为在CO中孵育2可能导致错误的结果。
- CTA需要大量的接种。接种量不足可能导致错误的结果。
- 接种在管底,接种不当可能导致弱酸性反应,给试验解释带来困难。
- 蛋白胨的利用导致碱性副产物的生产。长时间的孵育可能导致逆反应,其中碱性副产物掩盖了利用碳水化合物所形成的酸性副产物。
- 由于一些脑膜炎球菌菌株,主要是耐磺胺菌株,不能从麦芽糖产生酸,因此可能需要重复传代到非抑制培养基,以恢复其利用麦芽糖的能力。
- 一些淋球菌菌株需要CTA培养基配方中没有提供的额外化合物,因此不能在CTA培养基上生长。
参考
- 哈代的诊断
- 热费舍尔
- 贝克顿,迪金森公司,https://www.bd.com/europe/regulatory/assets/ifu/difco_bbl/252310.pdf.
- 东北实验室服务
- https://www.nelabservices.com/pdf/tech-sheets/cta-agar.pdf
- 罗纳德·m·阿特拉斯和詹姆斯·w·斯奈德。临床和公共卫生微生物学媒介手册。CRC Press. 2014,作者:Taylor & Francis Group, LLC