铁血清毒素染色

经过

什么是铁-苏木精染色?

这是一种常用的检测肠道原生动物的传统染色技术，主要是因为它的持久性和高清晰度地展示、观察和量化原生动物核结构的能力。铁苏木精是染色用于大多数肠道的原始形态描述原生动物发现在人类中。

苏木精铁染色法可以使细胞内和细胞核结构较细胞质暗，便于寄生虫形态的鉴定。

苏木精铁染色法既可用于新鲜标本，也可用于醋酸钠-醋酸福尔马林(SAF)保存的标本，或聚乙烯醇(PVA)保存标本。

铁-苏木精染色原理

苏木精是一种从中提取的天然染料Haematoxylon Campechechianum. ，一种植物植物，必须经历氧化（成熟）以形成血红酸素。氧化是一种缓慢的过程，涉及将苏木序的晶体溶解在水中，然后暴露于氧气（大气），并通过密切监测加入过氧化氢以避免过量。过氧化导致形成不是染料的氧血液素。

苏木精溶液由苏木精、血红素、氧化血红素组成。血红素作为媒染剂产生一个湖泊与铁硫酸铁反应产生铁湖（铁 - 苏木精），碱性染料。铁 - 苏木蛋白化合物是稳定的并且污渍急剧染色用于鉴定肠道原生动物的结构。

它主要用于排出回流，即首先夸大载玻片，然后差异化。含酒精碘的使用确保完全固定涂片。

铁血清氧基染色的目标

  • 从特定的粪便样本中证明肠道寄生虫的存在。
  • 区分原生动物寄生虫形态。

试剂

蒸馏水，氯化汞，乙醇，碘，铁铵（铁矾），盐酸，苏木精，酒精碘

铁 - 苏木精染色的程序

制备解决方案

  1. Schaudinn的解决办法:进入80ml蒸馏水，加入饱和氯化汞溶液，乙醇20ml（95％），乙酸3mL
  2. 碘溶液:加入98ml乙醇(95%)和2ml碘酒(2%)
  3. mordant-differentiating的解决方案:铁矾(硫酸铁铵)2g，盐酸1ml，蒸馏水98 mL
  4. 苏木精的解决方案:苏木精0.30 g，蒸馏水100 mL

笔记：储存在右温度时，铁血清毒素染色和媒染剂 - 差异溶液均为12个月。一旦制备了工作溶液，就会让它在使用之前7天保持稳定，用于染色。使用滤纸定期推荐污渍过滤以除去可能存在的任何碎屑，并始终保持容器以避免蒸发。

制备PVA-samples

  1. 应允许PVA保存的样品固定至少30分钟，并将含量与两个涂抹棒混合。
  2. 将以上的一些PVA混合物倒在纸巾上，静置2-3分钟，使PVA有效吸收。
  3. 使用涂抹器棒将纸巾上的一些凳子样本应用于玻璃载体，并在室温下在37℃或过夜将其送去培养箱中，以确保涂片完全干燥。
  4. 在干燥的涂片上加入碘醇。

制备SAF样品

  1. 将SAF-凳子样品混合并通过电线纱布将15mL离心管和离心为500毫秒的离心机1分钟
  2. 滗上清，500xg离心10min，收集沉淀物0.5ml ~ 10ml。如有必要，可重复步骤1或将沉淀物重悬于盐水中(0.85% NaCl)，并去除部分悬浮物。
  3. 在干净的玻片上准备一个涂片，从沉淀物中提取，在涂片上加入一滴梅耶尔白蛋白。然后加入一滴saf保存的样品沉积物，在室温下干燥30分钟后染色。
  4. 你也可以(不是必须)在染色前用Schaudinn溶液，然后用70%的酒精进行三色染色，然后加入碘醇。
  5. 干燥后，将涂片放在70％的酒精中

染色程序

一种。新鲜样品：

  1. 在干净的显微镜玻片上，用涂抹棒将粪便样本涂成薄薄的一层，趁着还湿着，将玻片浸入Schaudinn溶液中，至少30分钟。这被称为schaudin固定
  2. 将肖氏固定涂片置于70%酒精中去除多余的固定剂。
  3. 用流畅的自来水冲洗滑梯至少三次
  4. 将滑块放入铁血管内工作溶液中4至5分钟
  5. 用光滑的运行自来水（恒定水流进入容器）的洗涤载10分钟。
  6. 将载玻片浸入95％乙醇中5分钟。
  7. 将载玻片放入100％乙醇中5分钟。
  8. 将载玻片浸入二甲苯的两种变化中5分钟，每次变化
  9. 在污渍处添加一个permount(安装介质是为安装和储存长期的幻灯片而配制的)，并用一个盖玻片覆盖。
  10. 涂片在100倍显微镜下检查，并在油浸下检查，然后报告。

湾PVA - 保留样本：

  1. 在干净的显微镜玻片上，用涂抹棒将粪便样本涂成薄薄的一层，趁着还湿着，将玻片浸入Schaudinn溶液中，至少30分钟。这被称为schaudin固定
  2. 如果新鲜标本是液体，在载玻片上滴3 - 4滴PVA，混合几滴粪便，铺匀，在室温下过夜晾干，或在37℃的培养箱中保存数小时。注:本程序仅适用于均匀混合的液体样品，不适用半固体或固体粪便样品。
  3. 通过将载玻片放入碘醇中的载玻片来进行三色染色程序。
  4. 在70%乙醇中浸泡5分钟，然后在顺畅的自来水中冲洗10分钟
  5. 将滑块放入铁血管内工作溶液中4至5分钟
  6. 用流动的自来水冲洗幻灯片10分钟。
  7. 将玻片用70%乙醇浸泡5分钟。
  8. 然后再次用95%乙醇浸泡5分钟
  9. 在两个变化中，将载玻片放入100％乙醇中5分钟，每次变化都有5分钟。
  10. 将载玻片浸入二甲苯的两种变化中5分钟，每次变化
  11. 在污渍处添加一个permount(安装介质是为安装和储存长期的幻灯片而配制的)，并用一个盖玻片覆盖。
  12. 涂片在100倍显微镜下检查，并在油浸下检查，然后报告。

c.对SAF保存的样本进行染色

  1. 用肖丁溶液准备染色用的玻片，放在培养箱中风干数小时或室温下过夜。
  2. 将载玻片放入70%乙醇中5分钟，如上所述用SAF固定。
  3. 用顺畅的自来水冲洗滑梯10分钟。
  4. 将载玻片放入铁血管蛋白工作溶液中4-5分钟。
  5. 用顺畅的自来水冲洗幻灯片10分钟。
  6. 将载玻片放入70％乙醇中5分钟。
  7. 然后，将载玻片置于95%乙醇中5分钟。
  8. 然后在每次变化中将浸入100％乙醇中的载玻片浸入100％乙醇中5分钟。
  9. 将载玻片浸入二甲苯的两种变化中5分钟，每次变化都有5分钟。
  10. 在污渍处添加一个permount(安装介质是为安装和储存长期的幻灯片而配制的)，并用一个盖玻片覆盖。
  11. 涂片在100倍显微镜下检查，并在油浸下检查，然后报告。

铁 - 苏木精染料的结果与解释

使用苏木精铁染色法，在含有微生物的标本中，滋养体和囊肿的细胞质将被染成紫色。核染色质、类染色质体、红细胞和细菌被染成深紫色到黑色。

铁血清毒素染色

图:经改良铁-苏木精染色的肠道原生动物显微照片(结合了卡博尔褐藻染色步骤)。(一)Cyclospora.卵囊;(B)隐孢子虫卵囊;(C)双核内变形虫属fragilis双核营养体;(D)双核内变形虫属fragilis无核化的滋磨;（e）痢疾阿米巴囊肿;（F）痢疾阿米巴营养体;(G)贾迪亚囊肿;(H)贾迪亚滋养体。图像来源：美国微生物学会。

铁 - 苏木精染料的应用

  • 通过标本中原虫包囊和滋养体的显示来诊断寄生虫感染。
  • 它制备的永久性污渍是重要的参考。

铁-苏木精染色的优点

  • 它适用于肠道原生动物的常规诊断。
  • 它为原生动物的分化提供了高清晰度。

铁-苏木精染色的局限性

  • 如果未正确完成固定，则结果将失真。
  • 这是一个缓慢的过程，需要足够的时间来执行。
  • schaudin溶液中含有汞，因此必须在染色前将其完全去除。它干扰了染色试剂。

引用和来源

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