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Wheatley Trichrome染色定义
惠特利三色染色技术是寄生虫学中用于检测和鉴定肠道原虫的一种特殊的永久性缎子染色技术。
- 三色染色在pva固定或Schaudinn保存的粪便标本上进行。
- 确定的原生动物形态是囊肿和滋养体。
- 戈莫里在1951年发明了这种染色法，后来惠特利在1952年对其进行了改进，在初始程序中加入了固定和水化步骤，形成了一种快速而简单的肠道变形虫和鞭毛虫染色技术。
惠特利三色染色原理
该程序使用粪便或粪便薄膜样品永久涂抹，以便于检测和鉴定囊肿和滋养体。它非常敏感，因此它能够检测在我们安装检查期间错过的小型原生动物。Wheatley Trichome缎面是一种改性染色Gomori的组织的原始程序。该技术操作简单，操作迅速。它能产生均匀染色的肠道原生动物、酵母、人工制品和人类细胞的涂片。所使用的粪便样本是新鲜的，或固定在聚乙烯醇(PVA)中或保存在醋酸钠-醋酸-福尔马林(SAF)中。
制备试剂
- richrome（Wheatley的配方）
- Chromotrope 2R .....................。0.6 G.
- 浅绿色SF........................ 0.3 g
- 磷钨酸............... 0.7 g
- 醋酸（冰川）.................. 1.0毫升
- 蒸馏水……………………。100.0毫升
- 将1.0ml醋酸加入干燥部件，使其在室温下成熟3米。然后加入100ml蒸馏水，溶液的颜色变为紫色。保护溶液免受光，它应在室温下储存在玻璃或塑料瓶中。解决方案具有24个月的保质期。
- 70%乙醇加碘:准备原液时，将碘晶体加入70%乙醇中，直到得到深色溶液(1-2g/100ml)。使用时，用70%的酒精将高汤稀释至深红棕色或浓茶色。
- 70％乙醇
- 90％酸性乙醇：通过将99.5ml乙醇与0.5ml冰醋酸混合来制备。
- 95%的乙醇
- 100％乙醇
- 二甲苯或二甲苯替代品
- 安装介质（烫发）
- 浸入油
惠特利三色染色程序
注意:在进行惠特利三色染色时戴上手套。
凳子准备
- 准备新鲜粪便样本。用涂药棒将粪便小样本放在干净的无菌显微镜载玻片上。做非常薄的样品涂片。
- 不要干燥，立即将幻灯片放在Schaudinn的固定剂中，并允许它修复30分钟。如果粪便样品是含水的，则在涂抹的滑块上加入3或4滴PVA（用粪便样品滑动）并拌匀，使其在35° - 37℃或在室温下过夜干燥几小时。
染色涂片
笔记：PVA涂片制剂置于碘醇(70%乙醇加碘)中10分钟。对于不含氯化汞的其他样品，可省略碘步骤。
- 从Schaudinn的固定剂中取出滑块，将载玻片放入70％乙醇中5分钟。
- 新鲜粪便标本放入70%乙醇加碘溶液中1分钟，pva保存的风干标本放入5-10分钟。
- 将玻片放入70%乙醇中5分钟。
- 将载玻片放入70％乙醇中3分钟。
- 将载玻片放入三色染色中10分钟。
- 将载玻片放入90％乙醇中并加入醋酸1-3秒，并立即排出机架并进入下一步。请勿允许幻灯片留在此解决方案中。
- 在100％乙醇中浸入涂片的幻灯片，这是漂洗步骤。
- 将载玻片放入100％乙醇的两个变化3分钟，每次变化都有3分钟。
- 将其放入二甲苯5-10分钟。
- 使用诸如巨型电源的安装介质将涂抹罩用盖玻片安装。
- 让涂片在37°C下过夜或至少1小时后干燥。
- 涂片在显微镜下100倍检查。在200-300个油田进行浸油检查。
Wheatley Trichrome污渍的结果与解释
图:一种-惠特利三色染色(图片来源:原子科学），B-滋养宝石E.组织olytica（图像来源：piotr nowak等。）。C-囊肿E.组织olytica（图像来源：piotr nowak等。）。
- 观察原生动物滋养色素和囊肿。
- 原生动物滋养体的细胞质染色蓝绿色或浅紫色。
- 囊肿看起来更紫色。
- 可以鉴定酵母和人细胞如红细胞，多核细胞（PMN）和巨噬细胞的颜色染色。
- 核和包涵体也染色红色紫色。
- 背景染色绿色与原生动物的鲜明对比。
- 糖原分子被染色溶剂溶解，它们就像生物体一样清晰。
Wheatley Trichrome污渍的局限性
- Helminth鸡蛋和幼虫不能被Wheatley Trichrome染色永久染色。
- 为了鉴定和检查原生动物，染色需要高倍放大，在油浸下，原生动物的某些形态可能会丢失或遗漏。
- 一些原生动物不能使用诸如c的wheatley richrome染色来识别ryptosporidium以及和Cyclospora Cayetanensis。
- 韦氏三色染色涂片不能看到微孢子虫孢子。
惠特利三色染色剂的应用
- 用于诊断肠道原生动物感染。
- 用于鉴定寄生形态。
- 用于鉴定不同的酵母细胞。
- 用于鉴定人体细胞。
参考资料和来源
- 7％ -https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/staintaing.html.
- 3％ - https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/content/hugo/trichromestainkitrgnts.htm
- 1%——https://www.newcomersupply.com/product/trichrome-stain-wheatley-modified/
- 1％ - https：//assets.thermofisher.com/tfs-asset/lsg/manuals/ifu40134.pdf
- 1％ - https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20110310102411aazkalk
- 1%——http://www.med-chem.com/pages/lab_procedures/pdf/wheatleys_trichrome_stain.pdf
- < 1%, https://www.austincc.edu/ddingley/MLAB1331/LabManual/LabManual.htm