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明胶水解试验定义
明胶水解试验是作为推定测试进行的生物化学测试，用于鉴定葡萄球菌，肠球菌,和其他革兰氏阳性杆菌。
- 明胶水解试验也称为明胶液化试验，因为它涉及明胶酶存在下的明胶液化。
- 明胶酶是多种病原生物中的一种重要酶，它产生于细胞外，水解脊椎动物结缔组织中胶原蛋白中的明胶。
- 这些酶可能用作毒力因子，溶解宿主细胞的结缔组织，其有助于侵入性感染。
- 明胶是一种蛋白质，在明胶酶存在的情况下会液化，因为这种酶将明胶的复杂结构分解成氨基酸单体。
- 多年来，这种测试一直被用作一种假定测试，用于识别各种各样的生物体，比如沙雷氏菌属，假单胞菌，黄杆菌属， 和Clostridium。
明胶水解试验的目标
- 通过生产明胶酶酶测试生物体液化明胶的能力。
- 基于它们的水解明胶的能力将生物分为不同的群体。
明胶水解试验原理
- 明胶是从动物结缔组织、胶原蛋白中提取的蛋白质，在较低温度下形成固体结构。
- 蛋白质由一种称为明胶酶的一组酶代谢或降解。
- 明胶酶是将明胶水解成多肽和单个氨基酸的蛋白质水解酶。
- 明胶的降解，如大多数蛋白质，发生在两个步骤中;第一步涉及明胶变入多肽，然后将多肽转化为氨基酸。
- 明胶酶在大多数细菌中很重要，因为明胶是一种大型聚合物，因此不能运输到细胞中。
- 因此，酶将明胶分解成较小的单元，其可以被运输到细胞中并被细菌使用。
- 在水解试验中，使用明胶介质，通过介质的液化或氯化汞的浸没来观察明胶的水解。
- 添加到介质中的氯化汞析出明胶，明胶被水解的区域清晰可见。
微生物测试
- 需要明胶的革兰氏阴性棒用于识别，特别是对于荧光的分离假单胞菌:假单胞菌putida（消极）来自荧光假单胞菌（积极的）。
- 根据需要鉴定革兰氏棒。
使用的介质，试剂和用品
媒体使用
- 营养明胶介质用于演示明胶水解，或通过添加氯化汞或通过明胶液化。
- 下面给出营养明胶培养基的组成：
| S.N. | 成分 | 克/升 |
| 1. | 胰蛋白示 | 20.0 |
| 2. | 牛肉膏 | 3.0 |
| 3. | 明胶 | １０．０ |
| 4. | 锰硫酸盐 | 0．01 |
| 5. | 琼脂 | 15.0 |
| 最终pH在25°C：6.8±0.2 | ||
使用试剂
- 氯化物（HGCL2）
供应用
- 接种针
- 孵化器在37°C
- 吸量管
明胶水解试验的程序
A.媒体的准备
- 将约128克脱水培养基采用烧杯，具有1000毫升温热（50℃）蒸馏水。
- 然后用搅拌加热溶液，使其沸腾，以便完全溶解介质。
- 将培养基分配到几个试管中，并在15磅压力（121℃）下高压灭菌15分钟。在琼脂平板方法的情况下，将培养基在烧杯中高压灭菌。
- 管道介质以直立位置冷却至45-50℃。
b .明胶水解
可以通过营养明胶刺法或用氯化汞浸透琼脂板来观察明胶水解。
1.刺方法
- 管中的明胶培养基用4-5滴24小时肉汤培养基接种。
- 将接种管在37℃下在空气中孵育24-48小时。如果生物体在25℃下生长良好，则必须在25℃下孵育。
- 在第一次孵育之后，将管在4℃下置于4℃的24小时。
2.板方法
- 用接种环将18-24小时培养的重接种物接种在营养明胶培养基上。
- 然后将板在37℃温育24-48小时。
结果解释明胶水解试验
管测试
- 明胶在试管中的部分或全部液化表明了阳性结果。
- 在4℃下完全凝固明胶代表阴性结果。
数字：明胶水解。积极的;在管顶部液化。图像来源：贝利和斯科特的诊断微生物学。爱思唯尔。
板方法
- 添加汞氯化汞后，菌落周围的透明区域（HGCL2）表示琼脂平板上的阳性结果。
- 在加入酰氯氯化汞后，菌落周围没有明显的区域代表阴性结果。
数字：明胶水解反应阳性。图像来源：哥本哈根大学卫生与医学院兽医疾病生物学系。
丹麦。
控制生物
- 积极的结果:枯草芽孢杆菌。
- 负面结果:大肠杆菌。
明胶水解试验的用途
- 明胶水解试验用于测试生物体产生明胶酶的能力。
- 明胶水解试验有助于Serratia，假单胞菌，黄杆菌属， 和梭状芽胞杆菌．
- 测试区分明胶酶阳性，致病性金黄色葡萄球菌从明胶酶阴性，非致病性葡萄球菌表皮．
- 该试验可用于明胶酶产生菌属的鉴别，如沙雷氏菌属和普罗透斯来自其他家庭成员enterobacteriaceae.．
明胶水解试验的局限性
- 明胶酶主要作用于管状培养基的表面。当试管还热的时候摇晃试管可能会导致假阴性结果。
- 明胶可能在胶凝能力中变化;因此，应接种未录制的对照随测试接种。在读数之前，控制必须与测试一起冷藏。
- 在一些培养基或盐水中的管方法可能发生假阳性结果，延长孵育，即大于4小时。这可以在未征收的控制管中检测到。
- 平板法不推荐用于对挑剔物种和专性厌氧菌的明胶液化的测定。
- 如果试管在大于20°C的温度下孵育，则必须将试管冷却到20°C以下，然后才能进行反应。
参考资料和来源
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