催化试验 - 原理，程序，类型，结果，用途

什么是过氧化氢酶测试？

过氧化氢酶测试是有氧生物的生物化学测试，可检测生物体中的过氧化酶酶的产生。

• 过氧化酶是一种常见的酶，其在所有生物中发现，其在氧气中存活并催化过氧化氢的分解，释放水和氧气。
• 过氧化氢酶是病原生物中的必需酶，因为它保护生物体免受活性氧物种的氧化损伤。
• 酶中和过氧化氢的杀菌作用，并且其在细菌中的浓度与生物体的致病性相关。
• 多年来，过氧化氢酶测试已被广泛使用，因为它允许从像链球菌等过氧化氢酶阴性物种中的葡萄球菌阳性生物分化。
• 过氧化氢酶测试可用于大多数细菌的推定表征。
• 在有氧病症下，3％H₂O.₂使用，而15％h₂O.₂在厌氧条件下使用。

过氧化氢酶测试的目标

• 检测生物体生产过氧化氢酶的能力。
• 将异碳酶阳性生物（如Micrococci和Staphylocci）不同，如链球菌的过氧化氢酶阴性生物。

过氧化氢酶测试原理

• 有氧和兼性厌氧微生物的代谢活性产生含有过氧化氢和超氧化氢的毒性副产物（O.₂^-）。
• 这些产品对生物有毒，如果没有分解，甚至可能导致细胞裂解。在致病生物的情况下，发现不同的机制将这些产物分解为无毒物质。
• 能够将酶过氧化氢酶水解过氧化氢的细菌在水中和气态氧气中，这导致气泡的释放。

H₂O.₂----> H.₂o + O.₂
^催化剂

• 因此，过氧化氢酶的产生可以保护生物体免受过氧化氢在有氧代谢结束时积累的致命作用。
• 通过向细菌接种物中加入过氧化氢来证明过氧化氢酶的存在，这导致氧气泡的快速释放。通过不存在这种气泡，证明了缺乏酶。

微生物测试

• 年轻（如果可能的18小时或更少，如果可能）细菌菌落生长在琼脂媒体上，最好是血琼脂。
• 对于Anaerobes，菌落应在测试前暴露在空气中30分钟。

使用的试剂和用品

过氧化氢试剂

• 30％H.₂O.₂为了奈梅里亚
• 15％H.₂O.₂对于anaerobes.
• 3％H.₂O.₂对于其他细菌（在使用前在去离子水中购买或稀释30％1:10）

补给品

• 玻璃幻灯片
• 无菌木或玻璃棒或铂金环或电线

过氧化氢酶测试的程序

过氧化氢酶测试有多种方法或过程变化。这些方法包括载玻片或滴加过氧化氢酶试验，管方法，用于分化的热稳定的过氧酸酶分枝杆菌物种，半定量过氧化酶用于鉴定结核分枝杆菌，以及毛细管和盖玻片方法。临床细菌中最受欢迎的过氧化氢酶试验方法是载玻片或滴剂过氧化氢酶方法，因为它需要少量的生物并对相对简单的技术作用。

幻灯片方法

• 显微镜载玻片放置在培养皿内。使用培养皿是可选的，用于限制过氧化氢酶气溶胶，这可能携带活细菌细胞。
• 从良好的18至24小时菌落中收集少量的生物，其与无菌接种环或木制涂抹器棒并放置在显微镜载玻片上。
• 然而，没有菌落没有痛苦，特别是当从血液琼脂捡起培养时。
• 一滴3％h₂O.₂通过使用滴管或巴斯特液管在显微镜滑动上的生物体上。
• 观察到气泡的形成暗背景以提高可读性。

2.管方法

• 约4至5滴3％h₂O.₂添加到试管中。
• 使用木制涂抹器棒，收集来自良好的18至24小时菌落的少量生物体并置于试管中。
• 将管放置在深色背景上并观察到即时气泡。

质量控制

作为质量控制的形式，以下生物可用于阳性和阴性结果：

1. 金黄色葡萄球菌：过氧化酶阳性。
2. 链球菌Pyogenes：过氧化酶阴性。

过氧化氢酶测试的结果和解释

• 通过立即出现气泡来证明阳性测试。
• 一个或两个气泡的外观代表弱反应。
• 阴性测试由20秒后没有气泡或几个气泡表示。

报告结果

• 过氧化氢酶试验将葡萄球菌（阳性）与链球菌和肠球菌（阴性）分离。
• 芽孢杆菌是过氧化氢酶阳性，Clostridium.SPP。是过氧化酶阴性的。
• 该测试可用于分离粗糙的革兰氏阴性棒。
• 淋球菌产生由于超氧氧氧醇而与属的其他成员没有看到的气泡的增强阐述。

用途试验酶测试

• 过氧化氢酶试验对于将过氧化氢酶阳性微皮卡糖和过氧化氢酶阴性链球菌的葡萄球菌进行含量至关重要。
• 该测试还允许鉴别有氧细胞和厌氧生物。
• 已经发现测试的价值在某些肠杆菌痤疮的推定分化中发现。
• 据此对渗透性菌株的分化进行了重要考验Clostridium.，这是过氧化酶负数的，来自芽孢杆菌，哪种过氧化氢酶阳性。
• 该测试已被用于区分金属，并且在某些革兰氏阳性生物的形态中也有价值，例如航空电池和

过氧化氢酶测试的局限性

• RBCs含有过氧化酯酶，因此，为了避免伪阳性结果，血液琼脂不应该用殖民地捡起。如果殖民地难以拾取或不良好，则可以从不同媒体上的培养物中重复测试。
• 应从Mueller-Hinton琼脂测试测试。
• 收集金属细菌循环材料的菌落可能产生假阳性结果;然而，铂循环不会产生假阳性结果。
• 因为酶仅存在于活细胞中，因此不应使用超过24小时的菌落。较旧的文化可能会产生假阴性结果。
• 扭转将试剂添加到殖民地的顺序可能导致假阴性结果。
• 试剂和殖民地不应该混合。
• 一些菌株S.金黄色葡萄球菌可以通过液滴出现过氧化酶阴性，因此应使用管方法重复测试。
• 30％H.₂O.₂对皮肤非常苛刻。如果发生接触，请立即用70％乙醇，而不是水洗涤。

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