蛋黄琼脂

改良的蛋黄琼脂是在原配方的基础上，由McClung和Toabe开发的蛋黄琼脂，用于基于卵磷脂酶和脂肪酶的生产和蛋白水解活性的生物分离和分化。

图片来源：Noura El-Ahmady El-Naggar，Doi：10.5897 / AJMR11.346

蛋黄琼脂的组成

成分	Gms /升
酪蛋白酶水解产物	15.000
纸皮病摘要黄豆一顿饭	5.000
酵母抽提物	5.000
氯化钠	5.000
l -胱氨酸	0.400
氯高铁血红素	0.005
维生素K1	0.010
琼脂	20.000

最终pH(25°C): 7.5±0.2

蛋黄琼脂的原则

• 酪蛋白酶解物和木瓜消化黄豆膳食提供必需的营养素以及碳质和含氮物质。
• 酵母提取物提供复合b营养素。
• 氯化钠保持渗透平衡。
• l -胱氨酸是一种氨基酸，也是一种还原剂。
• 维生素K1和血红素有助于促进厌氧生物的生长。
• 具有卵磷脂酶的微生物将卵磷脂分解为不可溶的双甘酸酯和磷酸胆碱，这就产生了一个白色不透明的沉淀区，扩散到菌落的边缘之外。
• 具有脂肪酶的微生物将培养基中的游离脂肪水解，形成甘油和游离脂肪酸。
• 因此，不溶性游离脂肪酸的释放会形成一种彩虹色的光泽(水上的油)，当平板与光源成一定角度时可以看到。
• 与卵磷脂酶相比，脂肪酶不扩散并且仅在菌落附近的琼脂表面上产生反应。
• 通过核心菌落生长的暗氮区域的发展注意到蛋白水解。

蛋黄琼脂的制备及使用方法

1. 悬浮在900毫升蒸馏水中的50.41克。
2. 热量沸腾以完全溶解培养基。
3. 通过在15磅压力（121℃）的高压灭菌15分钟的灭菌15分钟。
4. 冷却至50-55°C，无菌地加入100ml蛋黄乳液（或每90毫升中加入10ml无菌蛋黄乳液）。
5. 充分混合后倒入无菌培养皿。
6. 在接种前，应使培养基平衡至室温。
7. 如果培养基尚未预还原，则必须将其置于厌氧条件下18-24小时进行还原。
8. 接种蛋黄琼脂，用纯24-72小时的培养改性。条纹培养基以获得孤立的菌落。
9. 接种后立即将培养基倒置(琼脂面朝上)置于厌氧气氛中，在35-37℃下培养。48 - 72小时。
10. 在孵育48小时后观察卵磷脂酶和脂肪酶生产和蛋白水解活性的平板。在孵化7天后，培养物不应被丢弃为阴性。

结果蛋黄琼脂释义

生物	增长
perfringens梭状芽胞杆菌	经济增长;卵磷脂积极;白色，不透明区从菌落边缘延伸，脂肪酶阴性;没有光泽
sporogenes梭状芽胞杆菌	经济增长;卵磷脂酶负;脂肪酶阳性;当板与光源成一定角度时，琼脂表面上的虹彩光泽
脆弱拟杆菌	经济增长;卵磷脂酶和脂肪酶阴性;琼脂没有反应
梭菌属necrophorum	Good-luxuriant增长;卵磷脂酶阴性;菌落表面和培养基上脂肪酶反应阳性;无蛋白水解活性，菌落周围无明显区域

蛋黄琼脂的用途

• 它是一种推荐用于检测卵磷脂酶和脂肪酶生产的富含磷酸酶和脂肪酶的蛋白水解活性的富集，非选择性和差异介质。
• 它用于各种各样的识别梭状芽胞杆菌，梭菌属， 和普氏菌
• 它也被用于纳格勒测验的推定鉴定perfringens梭状芽胞杆菌．

蛋黄琼脂的局限性

• 建议对纯培养的菌落进行生化、免疫学、分子或质谱检测以进行完全鉴定。
• 培养基不能提供鉴定细菌分离株的完整信息。必须对纯培养的菌落进行额外的生化和/或血清学测试，以进行完全鉴定。
• 应将负卵磷脂酶测试与未录制的对照板进行比较，因为卵磷脂酶可以在整个琼脂平板中扩散并使解释难。
• 有些微生物可能需要一个星期才能产生脂肪酶阳性反应。
• 应同时将增菌液与检测样品接种，以检测少量厌氧微生物。

参考

1. http://himedialabs.com/TD/M1043.pdf
2. https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/content/hugo/AnaeroGRO-EggYolkAgarMod.html
3. http://legacy.bd.com/ds/technicalcenter/inserts/8806621(03).pdf.
4. https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/content/hugo/eggyolkagarmodified.html.
5. https://assets.fishersci.com/tfs-assets/lsg/manuals/ifu1056.pdf.
6. Noura El-Ahmady El-Naggar, A. A. Sherief和Sarah Shawky Hamza。埃及astreptomyces aegyptia NEAE 102，一种新型纤维素降解链霉菌。《非洲微生物学研究杂志》Vol. 5(29)， pp. 5308-5315, 2011年12月9日。